根瘤菌AcrR蛋白表达、纯化及热稳定性分析.pdf

第40卷第1期内蒙古民族大学学报（自然科学版）Vol.40No.1

2025年1月JournalofInnerMongoliaMinzuUniversity（NaturalSciencesEdition）Jan.2025

DOI：10.14045/ki.15-1220.2025.01.010

根瘤菌AcrR蛋白表达、纯化及热稳定性分析

闫靖芸，赵飞燕，张涛，霍梦琦，冀照君，李国瑞

（内蒙古民族大学生命科学与食品学院，内蒙古通辽028043）

［摘要］成功克隆并表达纯化根瘤菌AcrR蛋白，同时对其热稳定性特征进行了表征。利用Sticky-End法

将AcrR基因插入到表达载体pHAT2中，构建重组质粒pHAT2-AcrR。通过热激法将重组质粒转化至大肠杆菌

E.coliBL21（DE3）感受态细胞，并在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下表达重组蛋白。结合亲和层

析、离子交换层析和凝胶色谱层析等技术获得高纯度的AcrR蛋白，SDS显示其分子量约为23.56kDa。

生物信息学分析预测，AcrR基因片段长度为606bp，共编码201个氨基酸残基，等电点（pI）为5.74，总原子量为

3168，分子式为CHNOS，该蛋白缺乏跨膜结构域，被归类为亲水性不稳定蛋白。进一步热稳定性实验

993157728530013

（TSA）发现，AcrR蛋白在50mmol/LCitricacid、500mmol/LNaCl、pH5.0的缓冲液中展现出较高的热稳定性。

这些发现为理解AcrR蛋白的生物学特性及后续的晶体结构解析和功能研究提供了实验数据。

［关键词］根瘤菌；AcrR基因；蛋白纯化；热稳定性分析

［中图分类号］Q816；Q939.114［文献标志码］A［文章编号］1671-0185（2025）01-0063-11

Expression，Purification，andThermalStabilityAnalysisofthe

RhizobialAcrRProtein

YANJingyun，ZHAOFeiyan，ZHANGTao，HUOMengqi，JIZhaojun，LIGuorui

（CollegeofLifeSciencesandFoodEngineering，InnerMongoliaMinzuUniversity，Tongliao028043，China）

Abstract：Inthisstudy，wesuccessfullyaccomplishedthecloning，expression，andpurificationoftheRhizobia

AcrRprotein，accompaniedbycharacterizationofitsthermalstabilityproperties.TheAcrRgenewasinsertedinto

theexpressionvectorpHAT2utilizingtheSticky-EndmethodologytogeneratetherecombinantplasmidpHAT2-

AcrR.TherecombinantplasmidwassubsequentlytransformedintoEscherichiacoliBL21（DE3）competentcellsvia

heatshocktransformation，therecombinantproteinwasexpressedinducedbyisopropylβ-D-1-thiogalactopyrano-

side（IPTG）.High-purityAcrRproteinwasobtainedthroughacombinationofaffinity