血清胆固醇的定量测定.ppt

实验二血清胆固醇的定量测定

〔磷硫铁法〕;一、实验目的;二、实验原理;胆固醇主要存在于动物细胞，参与膜的组成，质膜中的含量比细胞器膜中的多。胆固醇也是血中脂蛋白复合体的成分；并与粥样硬化有关，它是动脉壁上形成的粥样硬化斑块成分之一。胆固醇也是类固醇激素和胆汁酸的前提。

1784年，从胆石中提取出胆固醇。;总胆固醇的测定方法：

磷硫铁法

化学比色法醋酸酐法

邻苯二甲醛法

酶学方法〔试剂盒〕;用无水乙醇提取血清中的胆固醇，再与磷硫铁试剂作用，产生颜色反响，呈色度与胆固醇含量成正比，可用比色法测定血清中胆固醇含量。;血清经无水乙醇处理后蛋白质被沉淀，胆固醇及其脂那么溶解在无水乙醇中。在乙醇提取液中参加硫磷铁试剂〔即浓硫酸和三价铁溶液〕，胆固醇及其脂与试剂反响形成比较稳定的紫红色化合物，呈色程度与胆固醇含量成正比，可于560nm波长下进行比色测定。;正常血清中胆固醇的含量有随年龄增大而增加的趋势，其平均正常值在110～220mg/100mL。

胆固醇含量在400mg/100ml内，与A值成良好线性关系。

;三、实验器材;四、实验试剂;五、操作;2、比色测定

取枯燥试管3支，编号，分别参加无水乙醇1.0ml〔空白管〕，胆固醇标准溶液1.0ml〔标准管〕，上述乙醇提取液1.0ml〔样品管〕，各管皆参加磷硫铁试剂1.0ml，摇匀，10min后，分别转移至比色杯内，用可见分光光度计在560nm处比色。;管号/试剂;注：磷硫铁试剂须沿管壁缓缓参加，与乙醇液分成两层，立即迅速振摇20次，放置10分钟〔冷却至室温〕后，于560nm进行比色，以空白管调零读取各管吸光度。;六、计算;本卷须知：;2、所用试管和比色杯均须枯燥，浓硫酸的质量很重要，放置日久，往往因为吸收水分，而使颜色反响降低。

3、空白管应接近无色，如带橙黄色，表示乙醇不纯，应用去醛处理。;移液枪的使用;吸嘴的安装;;本卷须知;设定容量;;本卷须知;移液;;排液;移液;移液枪的养护及本卷须知;;