DB22_T3386-2022_小球藻发酵培养技术规范_吉林省.docx
ICS65.150
CCSB52
22
吉林省地方标准
DB22/T3386—2022
小球藻发酵培养技术规范
Thetechnicalspecificationforfermentationcultureoffreshwaterchlorellavulgaris
吉林省市场监督管理厅
发布
DB22/T3386—2022
前
言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件中的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由吉林省农业农村厅提出并归口。
本文件起草主要单位：吉林农业大学，吉林省水产技术推广总站、通化师范学院。
本文件主要起草人：张东鸣、陈玉珂、蔺丽丽、王秋举、郭志欣、刘洪建、赵云龙、高永生。
I
DB22/T3386—2022
小球藻发酵培养技术规范
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范围
本文件规定了小球藻（Chlorellavulgaris）发酵培养的仪器设备与耗材，培养基，培养，测定生
物量和采收。
本文件适用于淡水小球藻设施发酵培养。
2
规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB11607渔业水质标准
3
术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
培养基中接种少量的藻种，在适宜环境条件（温度、盐度、光照、pH值等）下，藻液达到一定的
4
小球藻发酵培养仪器设备应满足下列要求：
a)发酵罐,容量不低于50L；
b)恒温干燥箱，不低于2000W；
1
DB22/T3386—2022
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培养基
扩大培养用BG-11培养基，主要成分见表1。
表1BG-11培养基组成
贮存液
配制体积（mL）
成分
含量（g）
工作液体积（mL）
NaNO3(+N)/NaCl(-N)
K2HPO4·3H2O
Na2CO3
30/20.6
1
a
1000
0.80
0.40
50
柠檬酸
0.30
2
b
100
柠檬酸铁铵
EDTA-Na2
0.30
2
0.05
100
100
CaCl2·2H2O
MgSO4·7H2O
H3BO3
1.80
2
2
3
4
3.75
2.86
MnCl2·4H2O
CuSO4·5H2O
Na2MoO4·2H2O
Co(NO3)2·6H2O
ZnSO4·7H2O
HEPES缓冲液
1.81
0.079
0.391
0.04947
0.222
119.15
1000
1000
c
40
6
贮存液1用2mol/L的NaOH调pH到7.4～8.0；
贮存液2易生菌，高压灭菌后保存于4℃；
贮存液6为保种时用，平时培养可不加。
发酵培养的培养基主要成分见表2。
表2
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DB22/T3386—2022
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培养
水质
水质符合GB11607的要求。
扩大培养
6.2.1
藻种
小球藻纯度≥99.99%。
6.2.2
接种
无菌环境下，将已无菌的600mLBG-11培养基装入1L已灭菌处理的玻璃三角烧瓶中，然后将
200mL密度达到10ind/mL的小球藻接种于BG-11培养基中。
6
6.2.3
培养条件
pH6.5，培养温度28℃，充气量1.5L/min,培养时间为96h。
发酵培养
6.3.1
接种
在50L发酵罐中进行发酵培养，接种量为10%，将3L扩大培养的小球藻藻种接入27L发酵
装料体积30L，温度28℃，搅拌速度150r/min~300r/min，发酵时间96h。
在发酵培养达36h时向发酵罐内补充30g/L葡萄糖；在发酵培养达60h时向发酵罐内补充
10g/L尿素，培养至满96h结束。
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取8mL藻液装入10mL离心管中以8000r/min离心10min，弃上清，再用蒸馏水混悬藻泥，离
心弃上清，重复三遍。将藻泥用少量蒸馏水洗入预先称重的培养皿中敞口置于80℃烘箱中烘至恒重，
8
培养体积较大时可通过加入絮凝剂絮凝，过滤后干燥收集；培养体积较小时可使用离心机在8000
r/min，4℃条件下离心10min收集。
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