DB22T 2961-2019 淡水小球藻室内快速培养技术规范 .docx
ICS65.150B51
DB22
吉林省地方标准DB22/T2961—2019
淡水小球藻室内快速培养技术规范
TechnicalregulationsforindoorcultureoffreshwaterChlorellavulgaris
2019-05-27发布2019-06-17实施
吉林省市场监督管理厅发布
I
DB22/T2961—2019
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省水利厅提出。
本标准由吉林省农村农业厅归口。本标准起草单位：吉林农业大学。
本标准主要起草人：张东鸣、陈玉珂、王秋举、王森、蔺丽丽、刘洪健、郭志欣、高永生。
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DB22/T2961—2019
淡水小球藻室内快速培养技术规范
1范围
本标准规定了淡水小球藻（Chlorellavulgaris）培养的术语和定义，环境、设备及水，室内培养，采收及注意事项。
本标准适用于淡水小球藻室内培养。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB11607渔业水质标准
NY5073无公害食品水产品中有毒有害物质限量NY/T5361无公害农产品淡水养殖产地环境条件
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。3.1
指数生长期exponentialgrowthphase
在藻细胞达到一定密度后，藻细胞以指数生长的方式快速增殖的时期。3.2
稳定期stablephase
在指数生长期之后，藻细胞新生数与死亡数持平，藻细胞数保持稳定状态。3.3
批次培养batchculture
培养至稳定期后进行一次性采收所有藻液，清洗设备后进行重新接种再次培养。3.4
连续培养continuousculture
培养至稳定期后，采收部分藻液，采收体积不大于总培养体积的80%，之后通过添加培养基进行继续增殖培养。
4环境、设备和水
4.1环境
应符合NY/T5361的规定。
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4.2仪器设备
4.2.1酸度计、光度计、显微镜和分光光度计。
4.2.2微孔曝气、光照及二氧化碳供应设备、塑料桶、水族箱、玻璃钢桶、水泥池等。4.3水
应符合GB11607的规定。
5室内培养
5.1消毒
容器未注水之前用10mg/L～20mg/L高锰酸钾浸泡20min～30min，消毒后用大量清水充分清洗，保证设备内壁无高锰酸钾残留。
5.2配置培养基
5.2.1培养基按照表1要求配制。
表1BG11培养基
贮存液
配置体积（mL）
成分
含量（g）
1
1000
NaNO3(+N)/NaCl(-N)
30.00/20.60
K2HPO4·3H2O
0.8000
Na2CO3
0.4000
2
100
柠檬酸
0.3000
柠檬酸铁铵
0.3000
EDTA-Na2
0.05000
3
100
CaCl2·2H2O
1.800
4
100
MgSO4·7H2O
3.750
5
1000
H3BO3
2.860
MnCl2·4H2O
1.810
CuSO4·5H2O
0.0790
Na2MoO4·2H2O
0.3910
Co(NO3)2·6H2O
0.04947
ZnSO4·7H2O
0.2220
6
1000
羟乙基哌嗪乙硫磺酸
119.15
注1：贮存液2容易滋生细菌，高压灭菌后保存于4℃。
注2：贮存液6为保种时用，平时培养可不添加。
5.2.2配制好的培养基用2mol/L的NaOH调pH到7.4～8.0，置于4℃下保存。
5.3保种培养5.3.1容器
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用10L容器进行保种培养。5.3.2条件
光照强度2000Lx～3000Lx，培养温度为（25±1）℃,连续充CO2气体。5.3.3管理
5.3.3.1生长监测
每天检测藻密度。采用血球计数板法计算藻细胞密度，计算出藻液藻细胞密度；或采用分光光度法在680nm波长下测量分光光度值，绘制标准曲线后换算出藻液藻细胞密度。
5.3.3.2更换培养基
稳定期末更换1/2体积培养基。
5.4规模培养5.4.1容器
容器容积控制在1m3~2m3,深度不大于80c