DB51T 1835-2014 基因C型鸭甲型肝炎诊断技术规范.docx
ICS65.020.30B41
DB51
四川省地方标准DB51/T1835—2014
基因C型鸭甲型肝炎诊断技术规范
2014-09-19发布2014-10-01实施
四川省质量技术监督局发布
I
DB51/T1835—2014
目次
前言 II
1范围 1
2规范性引用文件 1
3术语和定义 1
4临床诊断 1
5病毒分离 2
6聚合酶链式反应 2
7诊断结果判断 4
8废弃物无害化处理 4
附录A（规范性附录）相关试剂配制 5
II
DB51/T1835—2014
前言
本标准附录A为规范性附录。
本标准由四川省农业厅提出并归口。
本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准起草单位：西南民族大学。
本标准主要起草人：张焕容、岳华、汤承、杨发龙、张斌、任玉鹏、王远微。
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DB51/T1835—2014
基因C型鸭甲型肝炎诊断技术规范
1范围
本标准规定了基因C型鸭甲型病毒性肝炎的临床诊断、病毒分离和反转录聚合酶链式反应检测的技术要求。
本标准适用于基因C型鸭甲型病毒性肝炎的诊断，反转录聚合酶链式反应适用于基因C型鸭甲肝病毒的检测与鉴定。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。
GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程。
《兽医实验室生物安全技术管理规范》（2003农业部公告第302号）。
3术语和定义
本标准采用下列术语和定义。
3.1
基因C型鸭甲肝病毒GenotypeCDuckHepatitisAVirus
鸭病毒性肝炎（Duckviralhepatitis,DVH）是由三种血清型的鸭肝炎病毒（Duckhepatitisvirus,DHV）引起雏鸭的一种以肝脏病变为主的急性、高度致死性和接触性传染病。三种血清型DHV之间不发生交叉反应，临床上最常见的为血清Ⅰ型DHV，又称鸭甲型肝炎病毒(DuckhepatitisAvirus,DHAV)，简称鸭甲肝病毒，为小RNA病毒科成员。根据基因组成差异，DHAV分为基因A型、B型和C型3种基因型，分别对应传统血清Ⅰ型DHAV，“台湾新型”和“韩国新型”DHAV。目前在我国大陆流行的主要是基因A型和C型DHAV。由基因C型DHAV引起的DVH称为基因C型鸭甲型病毒性肝炎。
3.2
聚合酶链式反应PCR
即聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于体外大量扩增特定的DNA片段。
4临床诊断
4.1临床症状
主要发生于1~3周龄以内的雏鸭，发病初期精神萎顿，废食，眼半闭呈昏睡状，以头触地，不久即
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DB51/T1835—2014
出现神经症状，运动失调，身体倒向一侧，两腿痉挛踢动，死前头向背部扭曲，呈角弓反张状，两腿伸直向后张开。
4.2剖检病变
肝脏肿大、质脆、色暗淡或发黄，表面有大小不等的出血斑点。
5病毒分离
5.1病料采集
无菌采集病鸭肝组织，冷藏尽快送检，如不能及时检测，应保存在-20℃。
5.2病毒分离
5.2.1病料处理
无菌采集病死鸭肝脏，按病料与灭菌生理盐水质量体积比1:3匀浆，将匀浆置于-40℃中反复冻融3次，10000r/min离心15min，上清液加入2000U/mL双抗，37℃作用30min后用细菌滤器进行过滤除菌，作为接种材料。
5.2.2病料接种
尿囊腔接种10日龄～12日龄鸭胚，每胚接种0.2mL，每个样品各接种4枚，37℃孵育，每天观察3次。
5.2.3收毒
弃去24h内死亡鸭胚，收集24h～120h内死亡鸭胚胚体并与尿囊液混合匀浆后，反复冻融3次，10000r/min离心15min，取上清液盲传3代，获得的病毒液-20℃保存，作为被检材料。
6聚合酶链式反应
6.1主要设备
6.1.1PCR扩增仪
6.1.2电泳仪、水平电泳槽
6.1.3凝胶成像系统
6.1.4冷冻高速离心机
6.1.5微量高速离心机（适合于对PCR