分子生物学复习.ppt

TrpTrp高时Trp低时mRNAOPtrpR调节区结构基因RNA聚合酶RNA聚合酶色氨酸操纵子(ThetrpOperon)trp操纵子—阻遏型操纵子色氨酸操纵子UUUU……UUUU……调节区结构基因trpROP前导序列衰减区域UUUU……前导mRNA1234转录强终止子第10、11密码子为trp密码子终止密码子14aa前导肽编码区:包含序列1形成发夹结构：序列1/2,序列2/3,序列3/4trp密码子UUUU……UUUU……34UUUU3’34核糖体前导肽前导mRNA1.当色氨酸浓度高时转录衰减机制125’trp密码子衰减子结构就是终止子可使转录前导DNAUUUU3’RNA聚合酶终止UUUU……342423UUUU……核糖体前导肽前导mRNA15’trp密码子结构基因前导DNARNA聚合酶2.当色氨酸浓度低时Trp合成酶系相关结构基因被转录序列3、4不能形成衰减子结构调控能达成的必要条件转录与翻译偶联，且速率大致相等结构基因的翻译与前导序列的翻译无关？真核生物中有衰减子调控吗？原核、真核、病毒蛋白翻译：翻译水平的调控（一）、SD序列对翻译的影响（二）、核糖体合成反馈抑制（三）、mRNA的稳定性（四）、反义RNA(antisense)的调控(五)稀有密码子(六)重叠基因五.真核基因表达调控1.顺式作用元件(cis-actingelement)(1)影响自身基因表达活性的DNA序列(2)非编码序列(3)包括启动子、增强子、沉默子反式作用因子(trans-actingfactor)-转录因子(1)概念：为DNA结合蛋白，核内蛋白，可使邻近基因开放（正调控）或关闭（负调控）通用或基本转录因子特异转录因子反式作用因子结构域DNA结合域转录活化结构域结合其他因子或蛋白的结合域(1)酸性α-螺旋结构域(2)富含谷氨酰胺结构域(3)富含脯氨酸结构域(1)锌指结构(2)螺旋-转角-螺旋(HTH)(3)亮氨酸拉链(4)螺旋-环-螺旋(HLH)(5)碱性α螺旋

真核生物基因多层次表达调控一.DNA水平的调控*二.转录水平的调控最重要三.转录后水平的调控*四.翻译水平的调控五.翻译后水平的调控*1.DNA水平的调控(1)染色质的丢失(红细胞）(2)基因扩增（癌细胞）(3)基因重排（抗体基因）(4)DNA甲基化(表达降低,X染色体失活中心)(5)染色体结构(常染色质和异染色质)2.转录调控反式作用因子的活性调节反式作用因子与顺式作用元件,通过成环、扭曲、滑动等方式调控。反式作用因子间存在组合式调控（使有限的反式作用因子可以调控不同基因的表达）.(1)合成后即有活性：需要时合成，可迅速降解(2)共价修饰：磷酸化-去磷酸化，糖基化(3)配体结合：如激素与受体的结合(4)蛋白质与蛋白质相互作用：二聚体3.转录后水平的调控(1)mRNA的选择性剪接内含子和外显子的选择转录终止信号的选择(2)mRNA运输的控制(3)转录后的基因沉默（RNA干涉）4.翻译水平的调控翻译起始的调控(1)未受精卵,隐蔽mRNA(maskedmRNA)；受精：招募因子(recruitmentfactor)，激活隐蔽mRNA(2)阻遏蛋白的调控：铁结合调节蛋白(3)翻译起始因子的调控：eIF-2磷酸化对活性的调节(4)5′AUG对翻译的调控作用：减少正常AUG启动翻译的作用，使翻译维持在较低水平(5)mRNA5′端非编码区长度对翻译的影响2.mRNA稳定性调节3.小分子RNA对翻译水平的影响(反义RNA)5.翻译后水平的调控新生肽链的水解,酶解.(1)前体的加工(2)半衰期:肽链N端第一个氨基酸严重影响蛋白的半衰期肽链中氨基酸的可逆共价修饰：磷酸化*、甲基化、酰基化通过信号肽分拣、运输、定位其它:酶活性的别构调节等六.分子生物学技术PCR技术杂交技术名称检测对象探针检测原理处理过程用途Southe