DB22_T396.7-2017_保健用品毒理学评价程序与检验方法第7部分：啮齿动物微核试验_吉林省.docx
ICS11.020
DB22
C05
吉林省地方标准
DB22/T396.7—2017
代替DB22/T396-2014
保健用品毒理学评价程序与检验方法
第7部分：啮齿动物微核试验
Toxicologicalevaluationproceduresandtestmethodsforhealthcareproducts
Part7:Micronucleustestinrodents
吉林省质量技术监督局
发布
DB22/T396.7—2017
前言
DB22/T396《保健用品毒理学评价程序与检验方法》拟分为如下部分：
——第1部分：评价程序；
——第2部分：急性经皮毒性试验；
——第3部分：长期经皮毒性试验；
——第4部分：皮肤刺激性试验；
——第5部分：皮肤变态反应试验；
——第6部分：细菌回复突变试验；
——第7部分：啮齿动物微核试验；
——第8部分：小鼠精子畸形试验；
——第9部分：哺乳动物培养细胞染色体畸变试验；
——第10部分：致畸试验；
——第11部分：致癌试验；
——第12部分：人体皮肤斑贴试验。
本部分为DB22/T396-2017的第7部分。
本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。
本部分代替DB22/T396-2014《保健用品毒理学评价程序与检验方法》，与DB22/T396-2014相比,
结构做了较大调整。除编辑性修改外，主要技术变化如下：
——增加了警示；
本部分由吉林省卫生与计划生育委员会提出并归口。
本部分起草单位：吉林省疾病预防控制中心。
本部分主要起草人：张晶莹、孙兰、孟令仪、宋昕恬、吴晓刚、隋自洁、高峰。
本部分所代替标准的历次版本发布情况为：
——DB22/T396-2004；
——DB22/T396-2014。
I
DB22/T396.7—2017
保健用品毒理学评价程序与检验方法第7部分：啮齿动物微核试验
警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能得安全问
题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施。并保证符合国家有关法规规定的条件。
1范围
本标准规定了保健用品啮齿动物微核试验评价程序。
本标准适用于保健用品啮齿动物微核试验检验方法。
2啮齿动物微核试验
2.1
实验动物
常选用小鼠，建议首选NIH小鼠，也可用BALB/C或昆明种等其他小鼠。一般每组10只～12只，雌
雄各半；或至少每组6只性成熟雄性小鼠。试验前在实验动物房至少适应3d～5d
2.2仪器和试剂
2.2.1仪器
将滤菌的小牛血清置于56℃恒温水浴保温30min灭活。灭活的小牛血清通常保存于冰箱冷冻室
里。
姬姆萨（Giemsa）染液
配制：将染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375mL和甘油，混合均匀，放置37℃
恒温箱中保温48h。保温期间，振摇数次，促使染料的充分溶解，取出过滤，两周后用。
1
DB22/T396.7—2017
磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）
11.81g
1000mL
加蒸馏水至
2.2.2.4Giemsa应用液
取一份Giemsa染液与6份1/15mol/L磷酸盐缓冲液混合而成。现用现配。
2.3受试物给予途径和方法
给受试物途径尽可能同实际应用一致。一般为单次给受试物，必要时也可多次给受试物。
2.4剂量和分组
至少设三个剂量组，并设阴性和阳性对照组。高剂量组以1/2LD50为准。如无法测得LD50可以不引
起动物死亡的最大浓度下的最大容积，作为最高剂量。中、低剂量组可按高剂量组半量递减。阴性对照
组可用溶媒或生理盐水。阳性对照组可用已知阳性药物如环磷酰胺。
2.5标本制作方法
2.5.1取材
动物颈椎脱臼处死后，打开胸腔，沿着胸骨柄与肋骨交界处剪断，剥掉附着其上的肌肉，擦净血污，
横向剪开胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血钳挤出骨髓液。
2.5.2涂片
将骨髓液滴在载玻片一端的小牛血清液滴里，仔细混匀。一般来讲，两节胸骨髓液涂一张片子为宜。
然后，按血常规涂片法涂片，长度约2cm～3cm。在空气中晾干。若立即染色，需在酒精灯火焰上方，
稍微烘烤一下。
将固定过的涂片放入Giemsa应用液中，染色10min～15min，然后立即用1/15mol/L磷酸盐缓
用滤纸及时擦干染片背面的水滴，再用双层滤纸轻轻按压染片，以吸附染片上残留的水分，再在空
气中晃动数次，以促其尽快晾干，然后放入二甲苯中透明5min，取出滴上适量光学树脂胶，盖上盖玻
片，写好标签。
先用低倍镜，后用高倍镜粗