DB45T 1868-2018 兜兰菌根化育苗技术规程.docx

ICS65.020.20B62

DB45

广西壮族自治区地方标准

DB45/T1868—2018

兜兰菌根化育苗技术规程

TechnicalregulationforseedlingcultivationofPaphioedilumwithmycorrhizalfungi

2018-10-20发布2018-11-20实施

广西壮族自治区质量技术监督局发布

I

DB45/T1868—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4组培苗移栽 1

5菌剂制备和处理 2

6栽培管理 3

附录A（资料性附录）培养基配方 5

III

DB45/T1868—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区农业科学院提出。

本标准起草单位：广西壮族自治区农业科学院花卉研究所。

本标准主要起草人：王晓国、闫海霞、周主贵、李秀玲、卢家仕、周锦业、何荆洲。

1

DB45/T1868—2018

兜兰菌根化育苗技术规程

1范围

本标准规定了兜兰菌根化育苗技术的术语和定义、组培苗移栽、菌剂制备和处理、栽培管理。本标准适用于兜兰菌根化育苗技术。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T8321(所有部分)农药合理使用准则

DB45/T1316同色兜兰无菌播种繁育技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

菌根mycorrhiza

土壤中的某些真菌与高等植物营养根形成的一种互利共生体。3.2

菌根真菌mycorrhizalfungi

能与植物根系形成菌根共生体的真菌。3.3

菌根菌剂mycorrhizalinoculant

以菌根真菌为生产菌种制成的微生物接种菌剂。

4组培苗移栽

4.1植株选择

选择根长2cm以上，主根数目2条以上，叶片数4～5片，叶长5.0cm以上的组培苗。4.2炼苗

将组培苗带瓶移至炼苗室内，不开盖炼苗10d～15d，再移至大棚开盖炼苗2d。

2

DB45/T1868—20184.3基质

栽培基质采用兰石和松树皮按体积比1:3混合，或者珍珠岩、蛭石和松树皮按体积比1:2:4混合，加入水使基质湿润后倒在白瓷盘中121℃灭菌30min。

4.4容器

塑料穴盘54cm×28cm，每盘50穴；或口径5cm黑色塑料杯。4.5移栽

取出组培小苗，清水洗去培养基，用0.1％高锰酸钾溶液浸泡5min，在荫棚下晾15min。每穴（杯）种植1株，将组培苗种植在基质中，轻压根部，淋透定根水。

5菌剂制备和处理

5.1菌剂制备

5.1.1菌根检测

在兜兰原产地选取野生植株的营养根，截取4cm～5cm的根段。横向徒手切片，厚度0.2mm～0.3mm。切片放入盛有无菌水的培养皿中，使其分散，挑取较薄切片，在显微镜下观察根段皮层细胞组织内是否形成有菌丝团，目镜10X，物镜10X。

5.1.2菌根消毒处理

选取具有菌丝团的根段，剥去毛被，在流水下冲洗干净。在超净工作台内，用75％酒精浸泡4min,无菌水冲洗1～2次,再用10％NaClO水溶液浸泡2min,无菌水冲洗7～8次。

5.1.3菌种分离与纯化

5.1.3.1在超净工作台内，将消毒后的根段切成1mm～2mm的小段,平铺于FIM固体培养基上,24℃恒温培养3d～5d。

5.1.3.2待观察到皮层细胞内长出的菌丝长入培养基时，挑取菌丝尖端接种到1/5PDA固体培养基。

5.1.3.33d后观察，如果菌落形态仍不平滑且有杂菌时，再次挑取菌落边缘尖端菌丝接种到1/5PDA固体培养基上，继续观察接种；，重复至菌落形成一个圆滑的形状且无杂菌时，挑取菌落边缘尖端菌丝接种到FIM固体培养基上保存。

5.1.3.4培养基用直径9cm培养皿装盛，培养基配方参见附录A。5