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感受态细胞的制备及重组质粒的转化.pptx

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感受态细胞的制备及重组质粒的转;重组DNA技术分：分离外源基因;重组DNA技术的基本工具“分子;受体细胞经过一些特殊方法（如：;是将异源DNA分子引入一细胞株;转化的方法化学的方法(CaCl;将处于对数生长期的细菌置入0℃;转化过程所用的受体细胞一般是限;影响转化效率的因素影响因素细胞;实验原理本实验以E.coli;抗Amp宿主细菌含Amp培养基;实验仪器、材料．超净工作台．高;实验材料、试剂大肠杆菌JM10;实验安排1受体菌的培;一、受体菌的培养从新活化的E.;二、感受态细胞的制备取1mL菌;三、质粒向感受态大肠杆菌细胞的;本次实验组预期结果：对照组：以;注意事项感受态细胞长时间处在常;思考题影响CaCl2法转化率的

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25生物化学实验--大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的转化.doc 大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的转化 【目的】 1. 掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的实验方法和技术。 2. 熟悉大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的实验原理。【原理】 1. 大肠杆菌感受态细胞的制备、转化原理细菌的生物学特性由于吸收外源 DNA 发生可遗传的改变叫转化，在基因克隆技术中，转化（ transformation ）特指以质粒 DNA 或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转染（ transfection ）是指噬菌体、病毒或以它为载体构建的重组子导入细胞的过程。未经特殊处理的宿主细胞较难进行转化，细菌处于容易吸收外源 DNA 的状态叫感受态，用理化方法诱导细
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感受态细的制备质粒DNA的转化和提取.doc 感受态细胞的制备 —LB液体培养基：胰蛋白胨，1%（W/V）；酵母提取物，0.5%（W/V）；NaCl，1%（W/V），用固体NaOH调节pH为7.0~7.2，分装于三角瓶中，灭菌后存于室温。摇动三角瓶，如果发现变浑浊，表明已染菌，应弃掉重新配制； —0.1 mol/L CaCl2：称取1.47 g CaCl2?2H20（Amresco分装）溶于100 mL去离子水中，灭菌后存于4℃； —离心管（50 mL或80 mL或100 mL），灭菌； —培养试管，灭菌； —1 mL枪头，灭菌； —1 mL加样枪； —滤纸，用牛皮纸包好后灭菌； —10 mL量筒，灭菌； —5 mL移液管，用棉花塞入
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