转录组分析(RNA-Seq)-课件文档资料.ppt

转录组分析（RNA-Seq）;RNA-Seq的技术背景

RNA-Seq的应用领域

RNA-Seq面临的挑战及发展前景;RNA-Seq的技术背景

;转录组是特定组织或细胞在某一发育阶段或功能状态下转录出来的所有RNA的集合;RNA-Seq原理;-*-;

1.样品RNA准备

2.测序文库构建

??使用oligodT微珠纯化mRNA

??mRNA片段化处理

??反转录反应合成合成双链cDNA

??双链DNA末端修复及3’末端加‘A’

??使用特定的测序接头连接DNA片段两端

??高保真聚合酶扩增构建成功的测序文库

3.DNA成簇（Cluster）扩增

4.高通量测序（IlluminaGenomeAnalyzerIIx）

5.数据分析

??原始数据读取

??与数据库比对并进行注释

??深层次数据分析

;RNA-Seq的应用领域

;图所示RNA-seq获得的数据能够进行全面的数据挖掘，既能够进行基因结构分析，鉴定UTR、可变剪切位点，也能够发现新的转录本及非编码RNA，比较样本间的表达水平差异;RNA-Seq面临的挑战;RNA-seq常见问题;RNA-Seq的发展前景;2、就目前来看,作为两个高通量的转录组学研究技术,在应用的某些方面既存在重叠和竞争也存在优势互补,一种技术能弥补另一种技术遗漏的部分,通常对一个生物学问题的回答需要不同实验技术的协同配合

;3、RNA-Seq的强项,就在于它是一个“开放系统”,它的发现能力和寻找新的信息的能力从本质上高于芯片技术,相信随着相关学科的进一步发展和测序成本的进一步降低,RNA-Seq必将在转录组学研究领域占主导地位

;特点;Thanks