仪器分析分子荧光分析法.PPT

一、分子荧光分析法简介 1.1 荧光的产生 1.2 荧光光谱任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激发光谱和发射光谱。 1.3 荧光定量 1.4 荧光仪的基本构造 1.5 分子荧光分析法的应用简介 ★ 常规分析应用： ☆ 定性分析：φf；λex；λem；峰形等 ☆ 定量检测： F = K﹒I0﹒φf﹒C ☆ 其它（略） ★ 高端生化研究： ☆ 分子相互作用研究； ☆代谢动力学跟踪； ☆ 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位“显迹”） 二、维生素B6注射液中维生素B6含的荧光法测定 2.2 实验流程 2.3 注意事项： 2.4 数据处理 从荧光光谱图上读出最大激发（λex）和发射波长（ λem） 用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度 计算注射液中维生素B6的含量， 病计算测定量占 标示量 的百分数 * 西北大学基础化学实验 《仪器分析实验》 分子荧光分析法 Molecular Fluorimetry For short: M-F (对光的吸收) 发生激发 态反应 分子内的激发和衰变过程 激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率： A1,A2 吸收: 10-15 s VR 振动松弛：? 10-12 s ic 内转化：? 10-11 s isc 系间窜越： 10-6 ~ 10-2 s F 荧光： 10-9 ~ 10-6 s P 磷光： 10-6 ~ 100 s 激发光谱 发射光谱 组成、结构与衍化信息 ☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件 ☆ 与其它溶质的相互作用 ☆ 反应动力学 F = K﹒I0﹒φf﹒C I0：光源强度； φf：荧光量子产率； C：荧光体浓度） 1）影响相对荧光强度的因素有哪些？ 2）试比较荧光法与紫外-可见分光光度法的分析性能。 ? 问题： （☆注意：在一定浓度范围内适用） ？问题：荧光光度计与紫外-可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？ 2.1 实验原理 ★ 在近中性的水溶液中有较强的荧光发射: （323nm/392nm 附近） ★在碱性介质中不稳定 ★易发生光降解 VB6 的化学结构 １、试液配制 ２、VB6的荧光光谱的绘制 ３、标准工作曲线的制作 ４、未知液的配制 ☆注射液的移取与稀释 ☆系列标液的测定顺序 ☆即放即测，防光降解 ☆荧光仪的开关机顺序