SPAG6和l1td1非小细胞肺癌中DNA甲基化转录调节.docx

SPAG6 and L1TD1 are transcriptionally regulated by DNA methylation in non-small cell lung cancers SPAG6和l1td1的非小细胞肺癌中DNA甲基化的转录调节 摘要 背景： DNA甲基化与其他表观遗传机制、基因转录活性共同调节，参与肺癌等恶性疾病的发病。在非小细胞肺癌（NSCLC）中，各种抑癌基因已被称为肿瘤特异性甲基化。然而，从大量的基因被鉴定为肿瘤特异性甲基化占绝大多数，肿瘤特异性甲基化至今不明。因此，本研究的主要目的是调查的详细机制（S）负责在NSCLCs的l1td1 SPAG6和基因转录调控。 方法: 我们分析了公开的RNA测序数据进行基因表达的分析检测。DNA甲基化分析的高分辨率熔体和亚硫酸氢钠基因组测序分析。此外，我们采用免疫组化的方法研究蛋白质的表达，细胞培养实验包括肿瘤细胞的生长、增殖、活力以及集落形成实验。此外，我们进行了异种移植实验中使用的免疫缺陷小鼠。 结果: 我们观察到在原发肿瘤mRNA表达下调l1td1 SPAG6和频繁（TU）样品相比，相应的非恶性肺组织（NL）非小细胞肺癌患者的样本，我们进一步观察两基因的重新表达和下调SPAG6和l1td1 mRNA表达的大多数NSCLC细胞系表观遗传学积极药物治疗后。当我们分析检测NSCLC患者涂和相应的NL样品频繁的肿瘤特异性DNA甲基化和l1td1是SPAG6。ROC曲线分析表明，这两个基因的甲基化能够区分这些患者的TU和NL样本。免疫组化显示SPAG6 / l1td1甲基化和蛋白表达下调的基因关系密切。此外，通过功能分析，我们观察到了细胞的生长，对pcmv6-l1td1转染肺癌细胞增殖和存活率。此外，来自pcmv6-l1td1肿瘤体积减少相比，pcmv6进入转染NCI-H1975细胞株在裸鼠移植瘤模型。 结论： 总的来说，我们的研究结果表明，l1td1 SPAG6和肿瘤特异的甲基化和DNA甲基化在NSCLCs参与了这些基因的转录调控。此外，在体外和体内实验显示肿瘤细胞生长抑制性非小细胞肺癌中l1td1。 关键词： 表观遗传学，DNA甲基化，非小细胞肺癌，SPAG6，l1td1 背景 DNA甲基化（简称甲基化）是一种重要的表观遗传修饰，调节基因的表达主要是通过结合甲基CpG结合蛋白（MBD）及其相关的染色质重塑因子DNA [ 1, 2 ]。研究表明，甲基化在各种分子和细胞过程中起着重要的作用，包括胚胎发育和基因组印记，以及恶性疾病的发病机制[ 3 - 7 ]。甲基化发生的共价键添加一个甲基胞嘧啶的5′碳在CpG二核苷酸的DNA甲基转移酶催化（Dnmts）[ 8, 9 ]。不同的遗传改变，可能通过抑制甲基化酶指标如5-′-脱氧胞苷逆转（5-AzadC）和5-氮胞苷（5-azaC）。再通过甲基化基因的表达通过DNMT抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂如曲古抑菌素A结合的协同效应（TSA）报道[ 10 ]。 在非小细胞肺癌（NSCLC）多肿瘤抑制基因（抑癌基因）是已知的，频繁的甲基化。除了其他表观遗传学和遗传因子的甲基化可能是负责这些基因[11-15]转录失活。然而，从~被确定是肿瘤全基因组的方法特异的甲基化500的绝大多数基因，肿瘤特异性甲基化是迄今未知的[ 12 ]。当我们还分析了公开可用的微阵列数据在原发肿瘤（TU）相比，非恶性肺组织（NL）非小细胞肺癌患者的样本中，我们观察到肿瘤特异性表达下调这些基因16名[ 17 ]。一个广泛的PubMed搜索发现，许多这些基因的功能是没有固定在NSCLCs，在其他类型的癌症。基于这些观察，我们选择基因SPAG6（精子相关抗原6）和l1td1（LINE-1型运输问题域包含1）的详细investigation.spag6位于染色体区域10p12.2和被认为是一种癌睾丸抗原（CTA）[ 18 ]。CTAs代表一个大家族的肿瘤相关抗原这是在免疫组织如睾丸表达但也在各种来源包括肺癌[ 19 ]肿瘤组织中检测到。SPAG6也表示在正常肺组织有纤毛功能[ 20 ]相关。它编码一种微管相关蛋白，作为微管本身或结合微管形成细胞的细胞骨架（）。有越来越多的证据表明，CTA的表达可能参与了肿瘤的发生，但是，到目前为止还没有报道关于参与SPAG6在恶性疾病生物学或肿瘤细胞的侵袭性[ 21 ]。l1td1位于染色体区域1p31.3在频繁的杂合性缺失（LOH）在非小细胞肺癌[ 22 ]观察。该基因编码人类胚胎干细胞自我更新和肿瘤细胞增殖所需的干细胞特异性RNA结合蛋白[ 23 ]。由于机构（S）失活，SPAG6和l1td1，没有详细的研究及其在NSCLCs发病机制中的作用还不清楚到目前为止，我们有兴趣进一步研究这些基因。 因此，我们决定基因的表达、甲基