第五章生产菌种的保藏.pdf

第五章 工业微生物保藏技术 Gaoys ?现代微生物发酵通常采用传代性能稳定的菌株进行 纯培养，绝大多数工业生产所用菌株是不可替换的。 （除非染菌、自然突变、破坏和死亡）； ?生产中菌种变异造成的经济损失是巨大的。 ?培养物可再分离或再从保藏机构购买，但花费的时 间和精力等都相当高； ?菌种是国家的重要资源的一部分； ?有效的菌种保藏方法可以避免或减少这些损失。 2 菌种保藏的基本原理 ? 挑选优良纯种，最好是休眠体（如分生孢子、芽孢 等）; ? 创造一个使微生物代谢不活泼，生长繁殖受抑制， 难以突变的环境条件（如干燥、低温、缺氧、缺营 养以及添加保护剂或酸度中和剂等），使保藏中的 菌种不进行增殖，不发生突变。 ? 菌种保藏的每种方法都有各自的优缺点，没有任何 一种方法对所有的微生物都是适宜的。 3 理想的菌种保藏方法的要求 ?存活：经长期保藏后菌种存活健在； ?重复性：保证研究结果获得良好的重复性； ?保证高产稳产：高产突变株不改变表型和基因型 （不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产 能力）； ?简便、经济。 基本措施：低温、干燥、真空、寡营养。 4 保藏方法的选择 从保藏微生物的要求及使用者的需要考虑 ?保藏的活度要求； ?增殖和细胞遗传变异的结果； ?需要保藏的样品数； ?取放菌种的频率； ?保藏方法的成本费用； ?菌种特性 ?实验室现有仪器的型号等 5 工业微生物菌种保藏技术 斜面保藏法 穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 菌种的保藏方法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法 6 一、斜面保藏法 菌种在适宜的斜面培养基和温 度条件下培养并生长良好 4－5℃ 冰箱保藏3－6个月 重新接种再行保藏 ?简便实用； ?短期保藏； ?菌种易发生变异，染菌。 7 二、穿刺保藏法 1％软琼脂培养基装入小试管或螺 口小管，高1-2mm，灭菌 将菌种穿刺接入培养基1/2处，培养，覆盖2- 3mm无菌液体石蜡，放入冰箱保藏 ?简便实用； ?用于好气性细菌等保藏； ?效果优于斜面； ?不适于利用石蜡为碳源的微生物（固氮菌、根霉等） 8 三、沙土管干燥保藏法 沙土烘干过筛（80目沙、100目土），混匀 后分装于小试管，高度约1cm 121 ℃ 高压间歇灭菌至无菌，烘干备用 菌种制成浓的菌或孢子悬液，或孢子直接 刮下与载体混匀 干燥器真空抽干封口 置于干燥器中5 ℃冰箱保藏 9 四、菌种冷冻保藏 ? 普通冷冻保藏技术(-20℃) ? 超低温冷冻保藏技术(-60－-80℃) ? 液氮冷冻保藏技术 ? 真空冷冻干燥保藏法 10 1、普通冷冻保藏技术(-20℃) 1－2ml菌液加入密封性能好的螺口管中，封口后 直接放入冰箱低温区（ -20℃ ）保藏即可 ?应用方便； ?一般要求菌悬液浓度较高； ?注意冰箱故障和停电事故； ?融化后菌种不能再继续低温