【2017年整理】细胞凋亡、坏死、细胞活性检查常见方法及试剂.docx

线粒体膜电位指示染料线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件. 它在凋亡过程中与caspase 活化同时发生并先于磷脂酰丝氨酸（PS）的外翻。基于以上研究，Biotium 研发了各种的新型的荧光探针用于测量线粒体膜电位。MitoView ? 633MitoView ? 633 是一种新型的用于测量线粒体膜电位的深红染料(激发光/发射光622/648 nm)。使用NucView ? 488 和MitoView ? 633 凋亡检测试剂盒可以在荧光显微镜(图.1)或流式细胞仪(图.2、3)下同时进行线粒体膜电位和caspase-3活性的检测。图 1. 使用MitoView ? 633进行活细胞染色:Hela 细胞图 2. 流式细胞仪分析：Jurkat 细胞一组用CCCP 使线粒体去极化，另一组使用staurosporine 作为凋亡诱导剂。 使用MitoView ?633 染色图3. 流式细胞仪分析：对照（A）与经staurosporine 处理(B)的Jurkat 细胞 （JC-1 染色）. FL1 (x- 轴) 为绿色荧光; FL2 (y-轴) 为红色荧光。 (A 图) 较高的红绿荧光比例表明线粒体膜电位未下降. （B 图）较低的红绿荧光比例说明： 由于staurosporine诱导了凋亡的发生，细胞的线粒体膜电位大幅下降。JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒JC-1通常被用于检测细胞中线粒体膜电位的变化。在健康细胞中,JC-1以聚合体(J-aggregates)，的形式存在在线粒体基质中，可以产生红色的荧光(激发光/发射光 585/590nm)。相反，在正在凋亡或坏死的细胞中，JC-1不能聚集在基质中，以单体的形式存在，从而发出绿色的荧光( 激发光/ 发射光510/527nm)，这样可以使用流式细胞仪和荧光显微镜、荧光计数仪通过测量荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。通过J C -1 从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，从而可以用于早期的细胞凋亡检测。Rhodamine 123Rhodamine 123 是一种绿色荧光染料( 激发光/发射光505/534)，广泛用作检测线粒体膜电位（流式细胞仪检测）。T M R E 和T M R M ：四甲基罗丹明乙脂或是甲基脂, 是穿膜型的红色荧光探针( 激发光/ 发射光548/573 nm)，它们很容易被线粒体摄取。这些荧光探针常用于线粒体膜电位检测（流式细胞仪检测）。DASPEIDASPEI 是一种红色的线粒体膜电位荧光染料( 激发光/ 发射光461/589nm )，被广泛用于高通量分析检测。DiI C1(5)DiI C1(5) 是一种深红的羟花青染料（激发光/发射光 638/658 nm), 常被用于检测凋亡细胞中的线粒体膜电位。MCB 谷光苷肽检测试剂盒在细胞凋亡事件的早期，细胞质中谷胱甘肽（G SH）水平开始下降。细胞内G S H 的排除非常活跃时，细胞液就由还原环境转为氧化环境，这可能导致了凋亡早期细胞线粒体膜电位的降低，从而使细胞色素C 从线粒体内转移到细胞液中，启动凋亡效应器caspase 的级联反应。MCB (Monochlorobimane) ( 激发光/发射光380/461 nm)是一种荧光染料，在GST 的作用下，它可以与谷胱甘肽结合并会发出蓝色荧光。可以通过荧光染料monochlorobimane(MCB) 体外检测凋亡细胞细胞质中谷光苷肽的减少来检测凋亡早期细胞内氧化还原状态的变化。( 图 4)图4. Jurkat 细胞分别以DMSO处理（作为对照）以及 1 uM staurosporine 处理( 凋亡诱导4小时)。使用 MCB 谷光苷肽检测试剂盒检测其谷胱甘肽（GSH）水平。NucViewTM488 Caspase-3 底物可在活细胞中实时检测caspase-3活性在凋亡早期的过程中，caspase-3 裂解对应的胞浆胞核底物，导致了细胞在形态上和生理生化功能上产生了一些列变化。NucView ? 488 Caspase-3 底物是一种穿膜型的荧光标记的caspase 底物，可在活细胞中实时检测caspase-3 活性。 传统的荧光caspase 底物不能用于活细胞的caspase 活力检测，因为其需要裂解细胞；其他的一些检测手段也仅仅只能检测在一个细胞群落中caspase的平均活力。基于荧光标记的caspase 抑制剂的检测技术(FLICA) 可以进入活细胞检测caspase 活力，但是荧光探针本身就是不可逆转的caspase 抑制剂，所以无法在活细胞中实时检测caspase 的活力。产品特性:? 双功能: 允许研究人员在凋亡细胞内检查caspase-