微生物学实验指导.pdf

微生物学实验指导 黄文芳 张 松 编著 华南师范大学生命科学学院 第一部分 基础实验 实验1 培养基的配制 一、实验目的和内容 目的：学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤。 内容：1．牛肉膏蛋白陈培养基的配制。 2 ．高氏 1 号培养基的配制。 3 ．马丁氏培养基的配制。 二、实验材料和用具 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/L NaOH、lmol/L HCl 、KNO 、NaCl 、K HPO ·3H O、MgSO ·7H O、FeSO ·7H O 。 3 2 4 2 4 2 4 2 试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH 试纸、棉花、牛皮纸、记号 笔、线绳、纱布、漏斗、漏斗架、胶管、止水夹等。 三、操作步骤 （一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl5g ，琼脂 15～20g ，水 1000mL，PH7.4～7.6 1 ．称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小 烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放入热水中， 牛肉膏使与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2 ．加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用 玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放 入己溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足 所失的水分。 3 ． 调 pH 检测培养基的 pH ，若pH 偏酸，可滴加 lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随 时用pH 试纸检测，直至达到所需 pH 范围。若偏碱，则用 lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节 通常放在加琼脂之前。应注意 pH 值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 4 ．过滤 液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用 4 层纱布趁热过滤，以利培养的 观察。但是供一般使用的培养基，这步可省略。 5 ．分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用漏斗以 免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的 l/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过 其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的 1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。 6 ．加棉塞 试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉塞的形状、 大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。 要使棉塞总长约 3/5 塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则 可用 8 层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。 7 ．包扎 加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾 湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以 5 支或 7 支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用 绳扎好。然后用记号笔注明、培养基名称、组别、日期。 8．灭菌 将上述培养基于 121.3℃湿热灭菌 20min 。如因特殊情况不能及时灭菌，则 应故人冰箱内暂存。 9 ．摆斜面 灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度， 便斜面的长度不超过试管总长的 1/2。 10．无菌检查 将灭菌的培养基放入 37℃温箱中培养 24～48h ，无菌生长即可使用，或 贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。 （二）高氏l 号培养基的配制 高氏 1 号培养基是用于