PCR产物纯化回收试剂盒操作方法及步骤说明书.doc

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp:// 杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://  ◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外◆ TRIpure Reagent 抽提指南◆ 目录号 RP02◆ 使用手册◆ 实验室使用，仅用于体外AidQuick PCR Purification Kit PCR产物纯化回收试剂盒 目录号：DR02 适用范围： 适用于PCR反应产物、酶切产物DNA片段、探针标记纯化回收，DNA样品浓缩等。 试剂盒组成、储存、稳定性： 试剂盒组成保存50次（DR0101）100次（DR0202）200次（DR0203）平衡液室温5 ml10 ml20 ml结合液BB室温30 ml60 ml100ml漂洗液WB室温15 ml 25 ml 50 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB室温10 ml15 ml20 ml吸附柱EC室温50个100个200个收集管（2ml）室温50个100个200个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。 储存事项: 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温 储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。 产品介绍： 在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。 产品特点： 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 使用了优质结合液，不含传统结合液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。 结合液加酚红调制成为了黄颜色，便于监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。 注意事项 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。 回收DNA的量和起始DNA的量，洗脱体积，DNA片断大小有关。一般1-15μg， 100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达95％。 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在－20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。 关于平衡液的使用 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μl的平衡液至柱子中。13000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。 操作步骤 提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入! 每100μl PCR扩增后体系或者酶切后体系加入500μl结合液BB，充分混匀。（如果初始体系小于100μl，请事先用双蒸水调整至100μl）。 平衡液预处理吸附柱： 使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体