发酵工程第二章工业用微生物菌种.ppt

抗生素产生菌的筛选 筛选模型：试验菌 筛选方法： 铺菌法 复印平板法 液体培养筛选 抗药性筛选 筛选模型：氨苄青霉素和β-内酰胺酶产生菌（克雷白氏菌）协同 I II 无试样时（不含棒酸时），I对II菌作用不大 有试样时（含棒酸时），I对II菌恢复药效，棒酸抑制水解酶活性 固体培养筛选 试验菌 代表微生物类型 金黄色葡萄球菌209p 革兰氏阳性球菌 枯草杆菌6633 革兰氏阳性杆菌 大肠杆菌 革兰氏阴性肠道细菌 耻垢分枝杆菌607 结核杆菌 白色念珠菌 酵母状真菌 青霉菌 丝状真菌 药理活性化合物产生菌的筛选 药理活性化合物是指能抑制人类代谢中某一个关键酶的微生物产物即酶抑制剂，从而达到治疗的目的。 筛选模型：目标酶 生长因子产生菌的筛选 筛选模型：营养缺陷型试验菌 筛选方法：利用被分离的微生物产物能否促进营养缺陷型试验菌生长 氨基酸产生菌的筛选 样品 ? ? 预处理 ? ? 初筛（除真菌） ? ? 在分离平板上生长获得多个单菌落 复印平板（copy 法） 平板培养，其中有产生氨基酸的菌落分泌氨基酸 对应到copy前相应 u.v线杀死长好的菌落 位置，找到目的菌落 再铺上一层含营养缺陷型试验菌的琼脂 培养后 产氨基酸菌落周围有生长圈 ? ? 目的菌落进行液体培养， 对产物进行定量测定 筛选产物含量高的菌株 多糖产生菌的筛选 取样特点：碳水化合物工业的废弃物 筛选方案：从菌落外观判断，选择外观呈粘液状的菌落，然后根据液体培养测定多糖含量来筛选高产菌。 细菌分离：以乳酸菌为例 取未成熟的酱醪样品1g至无菌磨口瓶中 ? ? 加麦芽汁至瓶口处，封塞，25℃培养24-48h 培养基中长出绢丝状波动物，镜检 杆状，阳性染色 初步断定乳酸菌 ? ? 用选择性培养基分批富集培养2-3代 稀释分离法分离单菌落，培养基为含麦芽汁、CaCO3的琼脂培养基? ? 根据透明圈挑选菌落 ? ? 性能测定（镜检杆状，染色阳性；乳酸纸层析鉴定） ? ? Rf值定性 （有机酸呈黄斑点） ?? 乳酸生成量测定（滴定法） 放线菌的分离：以产链霉素菌种的分离为例（从退化菌种中筛选） 取工业发酵液（含孢子）样品1环 放入带玻璃珠的装有10ml 无菌水的小三角瓶中，摇匀 ? ?采用稀释法制平板，获取单菌落 ?  斜面保藏 高产菌恢复 根据高产菌的特点，选择目的菌落 放大培养，发酵液性能测试 筛选模型：形态依据 真菌的分离筛选：以啤酒酵母的分离为例 取发酵液少许以10倍稀释成10-1-10-7 稀释分离法 取0.1ml 加入固体培养基铺平皿（×2） ? ? 在麦芽汁固体培养基上，25℃培养48-72h 形态筛选 根据正常株特点进行挑选，接种斜面备用 ? ? 纯化，采用平板分离法进一步纯化，至少反复三次 ???? ①生成子囊孢子速度测定 ②发酵力测定