乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法).doc

北京雷根生物技术有限公司 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法) 产简介： 乳酸(Lactic acid，LD)又称2-羟基丙酸是一种化合物，是一种含有羟基的羧酸，分子式是C3H6O3，参与生物化学很多反应过程。乳酸检测有化学氧化法、酶催化法、电化学法、酶电极感应器法。 乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)其检测原理是在NAD存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化乳酸生成丙酮酸，同时生成NADH。在碱性条件下显色剂与丙酮酸生成复合物，并使平衡偏向乳酸氧化为丙酮酸的方向，驱动反应完成，生成的NADH与乳酸为等量摩尔。通过分光光度比色法测定340nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出LD水平。 组成： 编号 名称TC0733 50TStorage试剂(A): 乳酸标准(20mmol/L)1ml-20℃ 避光试剂(B): 乳酸标准稀释液 1mlRT试剂(C): LD显色液C1: LD Assay buffer15ml4℃ 避光C2: NAD buffer2支-20℃ 避光C3: LDH solution50μl-20℃ 避光试剂(D): LD终止液200mlRT使用说明书1份 自备材料： 离心管或小试管 蒸馏水 水浴锅或恒温箱 比色杯 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 准备样品： 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于LD的检测。 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的LD，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。 配制标准品工作液：4℃避光保存2个月有效。 LD检测：按照下表设置空白管、对照管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的LD浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管。加入物空白管对照管标准管测定管蒸馏水/μl6300——待测样品(血清、血浆、体液等)/μl—6—6乳酸标准(5mmol/L)/μl——6—LD显色液/μl300—300300混匀，37℃水浴准确保温5min,立即加入终止液终止反应。LD终止液/ml1.81.81.81.8 用分光光度计检测，以蒸馏水调零，比色杯光径1.0cm，读取空白管、对照管、标准管、测定管的340nm吸光度(即A空白、A对照、A标准、A测定)，一般应数小时内检测完毕。 计算结果： 血清、血浆、尿液、脑脊液乳酸(mmol/L)=｛(A测定?A对照)/(A标准?A空白)｝×5 组织乳酸(mmol/g)=｛(A测定?A对照)/(A标准?A空白)｝×5/待测样品蛋白浓度(g/L) 参考区间： 健康成年人安静状态空腹静脉血0.6～2.2mmol/L健康成年人安静状态空腹动脉血0.3～1.47mmol/L健康成年人尿液乳酸排出量5.5～22mmol/d新生儿毛细血管血1.2～4.4mmol/L0～16儿童脑脊液1.1～2.8mmol/L 注意事项： 本法适用于自动分析仪，分别监测测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度。 如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好。抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC0699葡植物总糖和还原糖检测试剂盒(硝基水杨酸法) 相关：