2011叶绿体色素的提取分离及其理化性质.ppt

叶绿体色素的提取分离及其理化性质的观察 农业生物学实验教学中心 农业生物学实验教学中心 2011.3 一. 实验目的 因此，测定叶绿素含量便成为研究光合作用与氮代谢必不可少的手段，在生产中有着广泛的应用。 1. 学习叶绿体色素的提取方法。 2. 了解叶绿素和类胡萝卜素的一些主要理化性质。 绿色植物的光合作用是在叶绿体色素参与下进行的，了解叶绿体色素的组成、性质及测定对于理解光合作用的本质很有帮助。 植物色素包括：①??脂溶性的叶绿体色素： 存在于叶绿体，与光合作用有关，如叶绿素、类胡萝卜素等；②??水溶性的细胞液色素： 存在于液泡中，与花朵的颜色有关，如花青素属黄酮类物质。 二、原理与操作步骤 （二）叶绿体色素的提取原理和方法 各种植物叶绿体中所含的色素有数十种，可分三大类。叶绿素类、类胡萝卜素类和藻色素类（或称藻胆素类）。后一类只存在于藻类。以下只介绍前两类。 (一).实验材料：菠菜叶片。 叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b，酯类化合物）和黄色素（包括胡萝卜素（烃类）叶黄素（衍生的醇类））两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。 提取的操作步骤： 乙醇提取液： （1）取菠菜叶片洗净、擦干、剪碎、混匀，称2g，放入研钵中。 （2）加入少量石英砂及碳酸钙粉，加1～2滴管95%乙醇，研磨至糊状；再加10～15ml 95%乙醇，提取1～3min，过滤于三角瓶中；残渣用5ml 95%乙醇冲洗，一同过滤于三角瓶中。 提取的操作步骤： 水研磨匀桨： 另取2g剪碎的新鲜叶片，放入少量石英砂（不加碳酸钙粉），用水研磨。先加2ml蒸馏水，研至糊状，再加蒸馏水20ml，搅均，不过滤。 为做光破坏准备的 因吸附剂（本试验为滤纸）对不同物质的吸附力不同，当用适当的溶剂推动时，混合物中各成分在两相（流动相和固定相）间具有不同的分配系数，所以它们的移动速度不同，经过一定时间层析后，便将混合色素分离。 1.提取液中各成分分离： 用色层分析的原理加以分离 分配系数 吸附 脱吸附 再吸附 再脱吸附 叶绿体色素的结构决定极性不同，因而在滤纸上的迁移速率不同。 叶绿体色素 叶绿素 类胡萝卜素 叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素的化学结构 细菌叶绿素a 叶绿素a 叶绿素b 卟啉 植醇 叶绿醇 烃类 衍生的醇类 吸附剂：滤纸 推动剂：石油醚:丙酮:苯（10:2:1） 步骤： （1）圆形定性滤纸1张（直径11cm），用细头的吸管在其中 心戳一圆形小孔（直径约3mm）。 （2）另取一张滤纸条（5cm×1.5cm），沿纸条长度方向涂色 素，限制在0.5cm，风干后，重复涂抹数次。 沿长度方向卷成纸捻。 涂抹色素要适量，量多拖尾，量少色带看不清。 涂抹色素的技巧方法：将色素放到一块平板玻璃上，涂 抹纸片，这样涂抹的色带窄，分离效果好。 （3）纸捻带有色素的一端插入圆形滤纸的小孔中，色素一 端与滤纸平齐（勿凸出）。 （4）康维皿放置培养皿内，康维皿中央小室中加满 推动剂。 （5）把带有纸捻的圆形滤纸平放在康维皿上，使纸 捻下端浸入推动剂中。盖好培养皿(为什么？)。 （6）推动剂到达滤纸边缘时，取出滤纸，风干。 用铅笔标出各种色素的位置和名称。 （7）剪下一部分附到实验报告中。 注意： 1、色素多涂抹几次，风干后再涂抹第二次。 细，匀，直，浓。 2、涂抹的色素要适量，量多易发生拖尾，量少色带看 不清； 3、纸捻卷紧； 4、色素涂抹的宽度不要超过纸条的二分之一； 5、中心孔要小而圆；平齐，勿突出； 6、分离时一定要盖严，防止推动剂蒸发。 颜色从外往内分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色。 分别为：？ 实验结果： 标出各种色素名称 （1）.光对叶绿素的破坏作用 叶绿素（a，b）的化学性质很不稳定，容易受强光的破坏，特别是当叶绿素与蛋白质分离以后，破坏更快，而类胡萝卜素则较稳定。 （提取出叶绿素后先做这一步） 用15N研究燕麦叶片中色素的合成和分解发现，72小时全部更新一遍。 2.叶绿体色素的理化性质 光对叶绿素破坏的操作步骤： 稀释时不用严格定量？