第九章免疫学方法及其应用(修改).ppt

?机体防御机制 （1）多克隆抗体(polyclonal antibody，PoAb) 定义： 将抗原免疫动物，刺激动物体内多个B细胞克隆产生 的抗体，是针对多种抗原决定基的混合抗体。 特点： 来源广泛、制备容易，但不易大量制备； 特异性不高，常出现交叉反应； 评价：应用受到限制。 （2）单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb) 原理: 淋巴细胞增殖分化的浆细胞 (来自脾脏，有抗原特异性,能产生抗体，但短寿) 骨髓瘤细胞 (无抗原特异性，但长寿，能在体外无限繁殖) 利用原生质体融合技术进行细胞融合， 获得既能在体外培养又能产生单一抗体的杂交瘤细胞。 特点：纯度高、特异性强、效价高、无或少血清交叉反应， 制备成本低等特性。 已广泛用作临床诊断试剂或生化治疗剂。 单克隆抗体制备示意图 （2）单克隆抗体(monoclonal antibody，McAb) 应用：已广泛用作临床诊断试剂或生化治疗剂。 ①对微生物病原体的鉴定。 ②特异性抗原或肿瘤相关蛋白质的检测和鉴定。 ③疾病的被动免疫治疗和生物导向药物的制备。 ④检测血液中的药物含量。 ⑤分离某些昂贵的生物活性物质。 （3）基因工程抗体（重组抗体） 在基因水平上对Ig分子进行切割、拼接或修饰，重新组装成的新型抗体分子。。 特点：保留天然抗体的特异性和主要生物学活性，去除或减少 了无关结构，并可赋予抗体分子以新的生物学活性。 迄今已成功构建多种基因工程抗体，如人-鼠嵌合抗体、人源化 抗体、单链抗体(ScFv)、双特异性抗体(BsAb)及噬菌体抗体等。 ELISA for HIV antibody Microplate ELISA for HIV antibody: coloured wells indicate reactivity 第五节 生物制品及其应用 自学! 抗原抗体反应的一般特点 4.阶段性 第一阶段：发生特异性反应，特点是反应快，不被肉眼所见。 第二阶段：可见阶段，是非特异性的。反应较慢，受到电解 质、pH值和温度的影响。 5.敏感性 高度的敏感性，用于定性，还可用于定量和定位。 影响抗原抗体反应的因素 1.电解质 4.杂质异物 0.85％的NaCl生理盐水 2.温度 37℃水浴 3.pH值 多数血清学反应的适宜pH值为6～8 二、抗原、抗体间的主要反应 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、免疫电泳 4、补体结合实验 三、主要抗原抗体反应 (一)、凝集反应 定义：颗粒性抗原与相应的抗体在有电解质合适条件下反应 并出现肉眼可见的凝集团现象。（凝集原，凝集素） 一般稀释抗体(抗血清)，使其与抗原有一合适比例。 1 直接凝集反应 ①玻片法 定性试验。用已知抗体检测未知抗原。 用途：鉴定菌种，菌种分型，测定ABO血型等。 ②试管法 定量试验。用已知抗原测定血清中抗体有无及相对含量 发生明显凝集现象的最高血清稀释度（抗体效价，滴度 )，以表示血清中抗体的相对含量。 用途：测定患传染病的人或家畜血清中的抗体，诊断 三、主要抗原抗体反应 2. 间接凝集反应 定义：利用某些与免疫无关的均一的小颗粒物质作为载体， 将可溶性抗原(或抗体)吸附于表面，如与相应的抗体 (或抗原)结合，在有电解质存在的适宜条件下，发生 凝集现象。 表面吸附抗原(或抗体)的载体微球称为免疫微球。 特点：增大体积，敏感，可检测极微量抗原。 根据所用载体不同，常用的间接凝集反应有间接血球凝集反 应，碳凝集反应，乳胶凝集反应等。还有间接凝集抑制反应， 三、主要抗原抗体反应 (二)、沉淀反应 定义：可溶性抗原与相应抗体结合，在有适量电解质存在条 件下，形成肉眼可见的沉淀物。（沉淀原，沉淀素） 凝集反应与沉淀反应的区别： 凝集反应的抗原是颗粒性抗原，总表面积小，做抗体稀释。 沉淀反应的抗原是可溶性的胶体溶液，单位面积抗原多，需 抗体量多，抗原稀释。 以抗原的稀释度作为沉淀反应的效价。 类型：环状法、絮状法和琼脂扩散法（单向和双向）。 三、主要抗原抗体反应 图7-5 琼脂双