流式细胞术在白血病中的应用说课.ppt

* * * * * * * * * 报告 包括 出现或缺乏的异常细胞群 异常免疫表型 相比正常细胞群的抗原强度 增强，减弱，缺失 定量层面的判断 相对于全部CD45阳性细胞 (WBCs) 出现的其它细胞群 * * TCRVβ克隆 * 小结 流式细胞术有助于血液系统异常疾病的诊断 更加确定的诊断 排除其他疾病 有助于细分亚型 更准确的原始细胞辨别和定量 有助于预后判断 治疗后监测 快速 * 免疫表型分析与FAB分型基于不同的参数对白血病进行分型，两者的结果可一致或不一致； 对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂的病例，需结合多种检查，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。 * MRD背景 目前由于多种化疗药的联合应用，使多数白血病患者可以获得形态学的完全缓解（CR）。 但多数患者不能维持长期缓解，仍有相当多的患者再次复发。复发的主要原因是患者体内存在少量的形态学难以辨认的残存白血病细胞。 如果能够准确检测患者体内残存的白血病状态，可以有的放矢地进行治疗，使患者避免许多不必要的痛苦。 * MRD Outline of Leukemic Diagnosis Morphology: 1-5%, Cytogenetics: 1-5%, Flow cytometry: 0.1-0.01%, RT-PCR: 0.01-0.001% CR Primary leukemia OS Chemotherapies Auto SCT Allo SCT Induction Leukemic cells 100% 1% 0.1% 0.01 0.001 * * Molecular Measurements of Treatment Response —Clinical Application (2008 ASH Education Program Book p367) Application Action 检测治疗早期的反应佳 加强治疗 检测治疗早期的反应差 无需加强治疗 检测复发 加强治疗，准备HSCT HSCT前MRD 评估 优化HSCT的时间 HSCT后MRD评估 调整免疫抑制治疗时间，等 临床试验结束时的MRD评估 评价新的抗ALL药物或治疗的结果 * MRD与预后 当残存白血病细胞10-2，3年复发率为76-94% 10-3残存白血病细胞10-2, 3年复发率为37-53% 残存白血病细胞10-3, 3年复发率为8-20% 残存白血病细胞10-4, 3年无复发 * 各种MRD检测方法 检测残存白血病细胞的主要依据是在患者发病时找到患者的特殊表现，包括遗传学、分子生物学以及免疫学的特征。这些特征往往是正常血细胞所没有的，因此可利用这些标志鉴别正常细胞与异常细胞，特异地检测残存白血病细胞。 评价这些方法的有效性及应用性主要依据该方法的特异性、敏感性、简单性、重复性和速度。 FCM免疫表型、FCM DNA倍体、PCR、FISH是较好的方法。 * MRD流式分析原则 违背正常分化模式 诊断时 辨别出背离正常发育阶段的免疫表型 相对特异的抗原组合 随访 辨别出不同于正常免疫表型的不连续群体 以诊断的免疫表型作为出发点 * 免疫表型异常适合 MRD 检测 ALL 95 % 儿童ALL 90-95 % 成人 ALL AML 85% 儿童 AML 80-95% 成人 AML * 报告模板 * 病例一 AML 病例资料： 女，3岁，2009.6 初发 FCM印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞的26%，主要表达HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴细胞比例降低。 提示：急性髓系细胞白血病（AML-M2可能）。 基因：AML1/ETO 阳性。 * 病例一（续1） 2009.7 化疗 D33： FCM：可见残留，CD33+CD19+细胞约占0.04%。 基因： AML1/ETO 阳性。 * 2009.9 D70： FCM：未做。 基因：AML1/ETO 阴性。 2010.3 D245：