动物源性食品中克莱沙快速检测胶体金免疫层析法.docx

——PAGE \* MERGEFORMAT38— —PAGE \* MERGEFORMAT9—— 附件6 动物源性食品中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的 快速检测胶体金免疫层析法 1 范围 本方法规定了动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于猪肉、牛肉等动物肌肉组织中克伦特罗、莱克多巴胺及沙丁胺醇的快速检测。 2 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线（T线）上抗原结合，从而导致检测线颜色深浅变化。通过检测线与质控线（C线）颜色深浅比较，对待测样中克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进行定性判定。 3 试剂与材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水应符合GB/T 6682二级水规定。 3.1 试剂 3.1.1甲醇：色谱纯。 3.1.2 ???氧化钠。 3.1.3 磷酸二氢钾。 3.1.4 磷酸氢二钠。 3.1.5 盐酸。 3.1.6 氯化钠。 3.1.7 氯化钾。 3.1.8 三氮化钠。 3.1.9 乙二胺四乙酸二钠。 3.1.10 三羟甲基氨基甲烷，即Tris。 3.1.11 乙酸乙酯。 3.1.12 磷酸二氢钠。 3.1.13 氢氧化钠溶液（1mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.2）4g，用水溶解并稀释至100mL。 3.1.14 缓冲液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）0.3g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.5g，溶于约800mL水中，充分混匀后用盐酸（3.1.5）或氢氧化钠溶液（3.1.13）调节pH至7.4，用水稀释至1000mL，混匀。4℃保存，有效期三个月。 3.1.15 展开液：准确称取磷酸二氢钾（3.1.3）2g，磷酸氢二钠（3.1.4）1.44g，氯化钠（3.1.6）8g，氯化钾（3.1.7）0.2g，三氮化钠（3.1.8）0.5g，乙二胺四乙酸二钠（3.1.9）1.0g溶于约500mL水中，充分混匀后用水稀释至1000mL。室温保存，有效期一年。 3.1.16 Tris缓冲液（pH9.0，1mol/L）：称取121.14g Tris（3.1.10），溶于约700mL水中，充分混匀后加入盐酸（3.1.5）调试pH至9.0 后用水定容至1000mL。 3.1.17 Tris缓冲液（pH9.0，10mmol/L）：精密量取1mL 1mol/L Tris缓冲液（3.1.16），用水稀释定容至100mL。 3.1.18 磷酸二氢钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸二氢钠（3.1.12）24.0g，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.19 磷酸氢二钠溶液（0.2mol/L）：称取磷酸氢二钠（3.1.4）28.4g，用水溶解并稀释至1000mL。 3.1.20 磷酸盐缓冲液（pH7.4，0.2mol/L）：吸取19mL磷酸二氢钠溶液（3.1.18）加入81mL 磷酸氢二钠溶液（3.1.19），混匀。 3.1.21 磷酸盐缓冲液（pH7.4，10mmol/L）：精密量取50mL 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（3.1.20），用水稀释至1000mL。 3.1.22 固相萃取柱：丙烯酸系弱酸性阳离子交换柱。 3.2 参考物质 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥97%。 表1 克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量1克伦特罗Clenbuterol37148-27-9C12H18Cl2N2O277.1902莱克多巴胺Ractopamine97825-25-7C18H23NO3301.3803沙丁胺醇Salbutamol18559-94-9C13H21NO3239.311注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液配制 3.3.1 标准储备液：精密称取适量克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇参考物质（3.2），分别置于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为100μg/mL的克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇标准储备液，-18℃保存，有效期一年。 3.3.2 克伦特罗标准中间液（1μg/mL）：精密量取克伦特罗标准储备液（100μg/mL）（3.3.1）1mL置于 100?mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的克伦特罗标准中间液，临用新制。 3.3.3克伦特罗标准工作液（20ng/mL）：精密量取克伦特罗标准中间液（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于50mL容量瓶中，