第2节 基本原理与主要分离类型.ppt

第三章高效液相色谱分析 一、液-固吸附色谱 liquid-solid adsorption chromatograph 二、液-液分配色谱 liquid- liquid partition chromatograph 三、离子交换色谱 ion-exchange chromatograph 四、离子色谱 ion chromatograph 五、离子对色谱 ion-pair chromatograph 六、排阻色谱 size- exclusion chromatograph 七、亲和色谱(AC) Affinity chromatograph 讨论： 1）流动相流速对HPLC板高的影响（与GC对比） 2）涡流扩散项及其影响 3）传质阻抗项及其影响 1. 固定相与装柱方法的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp≤10μm） 首选化学键合相，匀浆法装柱 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇， 约1ml/min 3. 柱温的选择：选室温250C左右 1. 液固吸附色谱法（LSC） (liquid-solid adsorption chromatography) 2. 液液分配色谱法（LLC） (liquid-liquid partition chromatography, chemical bonded phase chromatography 3. 离子色谱法（IC） （ion-exchange chromatography and ion pair chromatography) 4. 空间排阻色谱法（SEC） （ steric exclusion chromatography 一、 液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography 二、 液-液分配色谱及化学键合相色谱liquid- liquid partition chromatography 1. 常规化学键合相 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 （1）分离机制：分配 + 吸附 不易流失 热稳定性好 化学性能好 载样量大 适于梯度洗脱 2. 反相键合相固定相 （1）分离机制：疏溶剂理论 正相——流动相与溶质排斥力强， 作用时间↑ ， K↑，组分tR↑ 反相——流动相与溶质排斥力弱， 作用时间↓， K↓，组分tR↓ （2）固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱——HPLC约80%问题） （3）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 固定相极性 底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈，THF 3. 正相键合相色谱 （4）流动相极性与K的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，K↑，组分tR↑ （5）出柱顺序：极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱 （6）适用：非极性~中等极性组分（HPLC80%问题） （4）流动相极性与K的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，K↓ （5）出柱顺序：结构相近组分，极性小的组分先 出柱极性大的组分后出柱 （6）适用： 氰基键合相与硅胶的柱选择性相似（极性稍小） 分离物质也相似 氨基键合相与硅胶性质差别大，碱性 分析极性大物质、糖类等 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 四、 离子色谱ion chromatography 离子色谱仪 1. 离子色谱法原理 2.离子色谱的优点 3. 离子色谱装置类型 离子色谱连续抑制装置图 在反相色谱中，通过加入缓冲溶液调节流动相pH值，抑制 组分解离，增加其K和tR，以达到改善分离的目的 1）离子抑制剂：弱酸、弱碱性物质 pH一定的缓冲溶液 2）K的影响因素：与流动相极性有关，还与pH值有关 选择流动相：应同时考虑极性及pH值 酸性物质——加入酸HAc tR↑，K↑ 碱性物质——加入碱NH3·H2O tR↑，K↑ 调节pH范围：3.0~8.0 pH8.0 破坏键合相与载体的结合 pH3.0 腐