DB15T 3719—2024和牛活体采卵体外胚胎生产技术规程.docx

ICS65.020.30CCSB43

15

内蒙古自治区地方标准

DB15/T3719—2024

和牛活体采卵体外胚胎生产技术规程

Technicalspecificationforinvitroembryoproductionwithovumpick-upofWagyu

2024-11-15发布2024-12-15实施

内蒙古自治区市场监督管理局发布

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由内蒙古元牛繁育科技有限公司提出。

本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。

本文件起草单位：内蒙古元牛繁育科技有限公司、草原和牛投资有限公司、北京九州大地生物技术集团股份有限公司、内蒙古自治区农牧业科学院、鄂尔多斯市草原和牛牧业有限责任公司。

本文件主要起草人：何牧仁、李婉、王标、王岗、傅仲、达来、白苏友拉图、赵军、羿静。

和牛活体采卵体外胚胎生产技术规程

1范围

本文件规定了和牛活体采卵体外胚胎生产技术流程，以及场地、仪器与溶液、供体的选择与饲养管理、活体采卵、体外成熟、体外受精、体外培养及胚胎质量鉴定、胚胎玻璃化冷冻与解冻的技术要求和证实方法。

本文件适用于和牛活体采卵体外胚胎生产。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4143牛冷冻精液GB/T25881牛胚胎

GB/T26938牛体内胚胎生产与移植技术规程

GB/T30396牛冷冻精液包装、标签、贮存和运输

GB/T31582牛性控冷冻精液

GB/T41194肉用母牛体况评分技术规范

GB/T50073洁净厂房设计规范NY/T4443种牛术语

3术语和定义

GB/T25881、GB/T26938、NY/T4443界定的术语和定义适用于本文件。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

BLR：囊胚率（BlastocystRate）CLR：卵裂率（CleavageRate）

COCs：卵丘-卵母细胞复合体（CumulusOocyteComplexs）EGF：表皮细胞生长因子（EpidermalGrowthFactor）

FSH：促卵泡素（Follicle-StimulatingHormone）

IGF：胰岛素样生长因子（InsulinLikeGrowthFactor）IVC：体外胚胎培养（InVitroCulture）

IVF：体外受精（InVitroFertilization）IVM：体外成熟（InVitroMaturation）

LH：促黄体素（LuteinizingHormone）

OPU：活体采卵（OvumPickUp）

5技术流程

和牛活体采卵体外胚胎生产技术流程见图1。应保留各环节的记录表、照片和影像等。

图1和牛活体采卵体外胚胎生产技术流程图

8活体采卵

6场地、仪器与溶液

6.1采卵室应在使用前用紫外灯照射消毒30min。

6.2捡卵室应在使用前用紫外灯照射消毒30min，操作台用75%酒精擦拭消毒。

6.3体外胚胎培养间应配备洁净室，洁净度应不低于1000级，级别应符合GB/T50073的相关规定。6.4所用仪器设备和溶液见附录A。

7供体的选择和饲养管理

7.1供体的选择

供体应满足以下条件：

a)系谱完整，和牛体型外貌评分应达到80分以上，评分标准见附录B；b)年龄为16～120月龄；

c)体质健康，卵巢发育正常，体况评分应达到5～7分，评分标准按照GB/T41194的规定执行。7.2供体的饲养管理

按照GB/T26938的规定执行。7.3供体的处理

7.3.1不处理

用活体采卵仪对供体直接采卵。

7.3.2超数排卵处理7.3.2.1方案一

具体操作步骤如下：

a)第0d用活体采卵仪检查卵巢，应刺破Φ5mm的卵泡；

b)第2d和第3d间隔12h各注射一次FSH，共注射4次。每次注射FSH剂量宜为100IU