黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS1菌株鉴定及其生防效果究.doc

黄瓜枯萎病病原拮抗细菌DS-1 菌株鉴定 摘 要：采用平板对峙法，从日光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出对黄瓜枯萎病病原菌（Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum） 具有稳定拮抗作用的细菌菌株DS-1， 通过形态观察、生理生化测定和16S rDNA序列分析对该菌株进行了鉴定，并研究了对黄瓜种子萌发的影响和对苗期枯萎病的生防效果。结果表明：菌株 DS-1 与已报道的 Brevibacillus brevis 16S rDNA 具有 100%同源性，结合形态特征和生理生化特性，确定 DS-1 为短短芽孢杆菌。基因库中该菌株的序列登录号为 EF108303。DS-1 对黄瓜种子萌发具有促生作用，苗期防治枯萎病的效果显著，防效达 84.92%。 关键词:黄瓜;黄瓜枯萎病病原菌;拮抗细菌;鉴定；Brevibacillus brevis Abstract: The taxonomic status, growth promoting and biocontrol effects against Fusarium oxysporum f. sp. cucumerinum of antagonistic bacterium DS-1 strain, screened by co-culture on PDA plates from rhizospheric soil of continuously cropped cucumber in solar greenhouse, morphology, physiological and biochemical characteristics, and 16S rDNA sequencing of the strain were determined, the effects on cucumber seed germination and seedling fusarium wilt biocontrol were studied. The results showed that: The 16S rDNA sequence of DS-1 strain shared 100% homology with Brevibacillus brevis from GenBank. Based on the results of 16S rDNA sequencing, morphological and cultural observation as well as physiological and biochemical determination, DS-1 strain was identified as Brevibacillus brevis, with GenBank accession number EF108303. DS-1 strain promoted germination of cucumber seeds, with significant biocontrol effects against fusarium wilt of cucumber seedlings by 84.92%. Keywords:cucumber;Fusarium;oxysporum.f.sp.Cucumerinum;antagonistic;bacterium;identification;Brevibacillus brevis 枯萎病是黄瓜生产中的主要土传病害，连作危害严重。对黄瓜枯萎病的防控，生产上多采取选用抗病品种、嫁接、化学防治、土壤消毒和轮作换茬等措施，这些措施均取得了一定效果。此外，还可以利用生物防治的方法。目前，人们已经从土壤中筛选出多种有益微生物，其中植物根际促生菌（PGPR）作为具有防病潜力和应用价值的一类生防菌受到国内外学者关注 ，并用于土传病害的防治 DS-1 是本课题组从日光温室连作黄瓜根际土壤中筛选出的对枯萎病病原菌具有良好拮抗作用的细菌菌株。对该菌株进行了鉴定，并研究其对黄瓜种子萌发的影响及对苗期枯萎病的生防效果，以期为进一步研究其作用机理和开发应用奠定基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料 LB 培养基用于细菌分离、纯化和培养；PDA培养基用于病原真菌培养和拮抗菌筛选；PD 培养基用于真菌孢子悬液制备。 TaqDNA聚合酶、dNTP、buffer 和 PCR 产物纯化试剂盒购自宝生物（大连）工程有限公司，琼脂糖购自上海生工生物工程技术服务有限公司，其它试剂均为进口或国产分析纯。 引物按文献（Weisburg et al.，1991；Wa