免疫学实验供临床医学本科用.ppt

* * 免疫学实验 （ 供临床医学本科用） 基础医学院免疫学教研室 李念虹 Email: lnh666?lnh666@126.com 教材 高等医学院校基础医学实验教学系列教材 ?免疫学实验? 科学出版社，2008年6月 主编 朱道银，吴玉章 临床医学本科实验内容及安排 有 4 免疫酶斑点试验 4 有 4 免疫标记技术 3 有 4 沉淀反应 2 　 4 凝集反应 1 录像 学时数 实验课内容 非临床医学本科实验内容及安排 有 4 免疫标记技术 3 有 4 沉淀反应 2 　 4 凝集反应 1 录像 学时数 实验课内容 一、免疫学实验注意事项 1.学生进实验室必须穿白大褂，不得穿拖鞋。 2.学生在实验过程中应遵守实验操作规程和实验室秩序，按要求完成实验。 3.学生应爱护实验设备、器材等公物，厉行节约；若损坏实验用品，要及时报告。 4.需回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸内；废弃的使用品仍-入垃圾桶内。 5.实验结束，清理好桌面，由班干部安排值日学生做清洁；做完清洁，关好水电、门窗，由带教老师检查认可后，值日学生方可离去。 二、免疫实验课目的 1.验证所学理论知识。 2.训练基本操作技能，培养独立工作能力。 三、要求 1.严肃认真。 2.多想、多看、多做。 3.当堂完成实验报告。 四、Ag-Ab反应的相关知识 血清学反应——即体外进行的Ag-Ab反应。 由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故 称之为血清学反应。 1.Ag-Ab反应的基本原则 （1）用已知抗体检测未知抗原； （2）用已知抗原检测未知抗体。 2. Ag-Ab反应的特点： （1）特异性 （2）可逆性 （3）可见性 3.影响Ag-Ab反应的因素 （1）电解质：0.85% NaCl （2）酸碱度：pH6～8 （3）温度：37℃ 4.Ag-Ab反应类型： （1）凝集反应 （2）沉淀反应 （3）补体结合反应 （4）中和反应 （5）免疫标记技术 4大经典免疫实验 实验一 凝集反应 一、目的要求 1.掌握血清学反应概念、特点。 2.熟悉凝集反应的概念、常用凝集反应的实验方法及结果判定。 3.了解凝集反应的原理、类型及其用途。 二、实验内容 1.直接凝集试验(玻片法) ——ABO血型鉴定(每人做) 2.间接凝集试验 ——类风湿因子检测(小组做) 三、凝集反应相关知识 （一）概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。 颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素 · 颗粒性抗原： 光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、RBC等。 · 可溶性抗原： 光镜下无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。 （二）凝集反应类型 1.直接凝集反应 2.间接凝集反应 1.直接凝集 ——玻片法 已知Ab,测Ag，为定性实验； 用途：鉴定菌种、菌种分型、血型鉴定。 ——试管法（如肥达氏反应） 已知Ag,测Ab，为半定量实验； 用途：辅助诊断肠热症等。 2.间接凝集反应 RBC——间接血凝试验 用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中的相抗体量。 乳胶——间接乳胶凝集试验 用途：检测类风湿因子等。 间接凝集抑制试验 ——妊娠试验 （已知） （已知） （已知） （已知） 反向间接凝集试验 ——某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。 四、实验操作内容 （一）玻片法—— ABO血型鉴定（每人做） 用已知血型Ab,测未知血型Ag；为定性实验。 ABO血型系统 血型 红细胞表面的血型Ag 血清中的血型Ab A型 A 抗B B型 B 抗A AB型 A、B — O型 — 抗A、抗B 1.材料 已知Ab：标准血清 —— 抗A、抗B 待测Ag：红细胞血型抗原 2.操作步骤 (1)无菌操作采血(无名指尖)于NS试管→形成约 2～5%红