一种新的果蝇唾腺染色体制片方法1).pdf

遗传 HEREDITAS(Beiiing)14(2)：35-361992 实 与 验 方 技 一种新的果蝇唾腺染色体制片方法’‘ 法 术 彭先步 王明忠 南（京师范大学生物系，210024) 果蝇 (Drosophilamelanogaster）作为一 1.染色法 (1)取硅化载片，用卫生纸 种很好的遗传学研究材料，在本世纪初就得到 槟净，（如图1-A）分别滴两滴45多乙酸和一小 应用。由于它具有巨大的唾腺染色体，其上排 滴改良苯酚品红[61［o (2）取肥大的三龄幼虫一 列有特征性的带纹，因此，在进行染色体畸变分 条，0.7务氯化钠溶液洗净后放人第一滴乙酸内 析及对染色体的原位杂交和基因定位等研究方 取出唾液腺。 (3）将唾腺移人第二滴乙酸 面，更具有得天独厚的优越性。 中，尽量剔除脂肪。(4）将唾腺移人染液中放 在国内，果蝇的唾腺染色体的制片与观察 置2-3分钟，擦净用过的两滴乙酸。(5)将硅 也很受重视，【一”。 目前常用的传统的压片法虽 化的盖片 （18mm）加在染液上。(6）把载片放 然简单，但效果并不理想，较难获得分散良好的 在吸水纸上，用另一张吸水纸盖在盖片的右侧 染色体图象，更无法对臂上的精细区带进行结 边缘，用左手食指与中指扶住，以防盖片移动。 构上的分析。为此，本文介绍一种国外新近采 (7）用尖头镊子轻压一下唾腺，然后从唾腺位 用的唾腺染色体制片法— 挤压划线法。 置开始，螺旋式轻敲盖片，直至盖片边缘 （图1- B)(8)将整个载片翻转，使盖片处于载片与吸 材 料 与 方 法 水纸之间。用右手双指从盖片的一侧轻压，使 （一）载片与盖片的硅化 两片之间的液体向另一侧流动 （图 1-C)o(9) 将载片与盖片洗净晾干，放入5%的硅化 再将载片翻转，使盖片朝上，用吸水纸扶住盖片 液 （，％二甲基二氯硅烷，Dimethyldichloro- 一侧，用镊子从盖片的一侧起向上作折线式划 s1lane上海试剂一厂。95多的氯仿），半小时 动，让两片之间的液体朝另一侧流动。注意，两 后取出，分散晾干后，再放人 100多的乙醇中半 次使液体流动的方向要一致 （图1-D). (10) 小时，取出分散晾干。这些步骤的操作须带手 吸出溢出的液体，普通光镜观察。 套，并在通风橱内进行。硅化后的片子可连续 2．不染色法 （1)如上述方法取 出唾 使用多次。 腺，剔除脂肪。(2）将干净唾腺移人滴在盖片 二（）果蝇的培养 上的一小滴乳酸一冰醋酸溶液。 乳（酸：水：冰 培养基为常规的玉米粉培养基。将酵母粉 醋酸二1:2:3)(3)4-5分钟后，用另一张载片 （广东省东莞糖厂酵母分厂）用无菌水调成干糊 轻盖于盖片上，翻转，使盖片朝上。(4）按上述 状，放人培养基的一例，每瓶放人约蚕豆粒大 染色法 6（）一 （9）步骤制片。(5)相差显微镜观 小的酵母糊。再放人果蝇7-8对，1890恒温 察。 培养，一星期后取肥大的三龄幼虫作材料。由 PengXianbuetal.:ANewPreparationMethod 于雄性果蝇的唾腺染色体联会不完全，选用雌 ofPolyteneChromosomeinDrosophilamelana- 性果蝇幼虫则效果更好。 gaster 1.）本文承陈宜峰教授审阅指导，特此致谢。 （三）唾腺染色体制片方法口 本文于 1990年10月29日收到。