糖尿病视网膜病变患者血清和糖尿病大鼠视网膜中BDNF的降低.doc

精品论文 参考文献 糖尿病视网膜病变患者血清和糖尿病大鼠视网膜中BDNF的降低 张巍，杨宇光Delta; 　　中国医科大学附属盛京医院大连医院眼科，辽宁大连116000 　　【摘要】 目的 脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor，BDNF)最富含于视网膜内，因糖尿病不能凋整其水平，从而可以损害视恻膜。方法 我们应用ELISA检测法检测了糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)患者血清中的BDNF和用链脲佐因素(streptozotocin，STZ)引起糖尿病大鼠血清和视网膜中的BDNF水平。结果 在增殖性糖尿病视网膜病变(proliferative diabetic retinopathy,PDR)患者血清中的BDNF水平较非糖尿病健康对照组明显减少(10.0plusmn;8．1～25.8plusmn;8.5ng／ml，Plt;O.001)，比较无视网膜病变的糖尿病患者也明显减少(10.0plusmn;8.l～21.8plusmn;4.9ng／ml，Plt;0.001)，而糖尿病大鼠比较非糖尿病鼠对照组，其视网膜和血清中的BDNF也明显减少(Plt;O.05)。此外，用Western blotting技术检测视网膜中原肌凝蛋白(tropomyosin)有关的激酶(TriB)受体表达水平，在糖尿病大鼠较非糖尿病对照组有明显降低(Plt;O.001)，、半胱氯酸蛋白酶Caspas-3的活性检测在引起糖尿病3w后的大鼠视网膜中却是增高的，且一直维持至10w仍然增高，与BDNF的水平呈负相关(r=-0.544，P=0.013)。 结论 糖尿病人的BDNF水平降低，可引起早期糖尿病视网膜的凋亡和神经变性，其后在DR中引起神经血管的损害。 　　【关键词】糖尿病视网膜病变；神经变性；脑源性神经营养因子；凋亡；血管新生 　　糖尿病视网膜病变（DR）是一严重威胁视力可使患者致盲的疾病，现在DR已被广泛人为是一种神经血管性疾病，而非既往只认为是一血管性病患。早期糖尿病患者的视网膜功能试验和在实验性糖尿病动物视网膜所做的细胞和分子学研究，都提示在糖尿病发生后短期内，出现任何血管损害症状前，其神经元脆弱而易受损害【1、2】。许多研究报告糖尿病可引起神经元的慢性丧失，由于凋亡率增加和神经胶质细胞活化，视网膜内神经胶质、神经元细胞和视网膜血管系统紧密的相互作用可维持视网膜正常功能所需要的内环境稳定【1、3】。在脑的活体和神经元细胞体外研究中，都发现神经元神经胶质细胞所产生的BDNF，能影响细胞的分化、突触接合、可塑性生长和细胞的存活【4、5】，然而BDNF在DR中的作用仍未完全清楚。本文重点介绍有关BDNF在DR患者血清及糖尿病啮齿动物视网膜和血清中的水平，探讨BDNF在DR发病机理中的可能作用。 　　1对象和方法 　　1.1对象 　　病例 88例测试对象如表1，其中非糖尿病人19例，系参加年度体检全身无病的健康者，作为依照，47例PDR患者，因牵引性视网膜脱离施行玻切手术和/或清除玻璃体积血。所有糖尿病患者均已采用药物治疗，口服抗血糖或注射胰岛素，伴有高血压者同时用抗压药治疗。 　　表1 88例测试对象 　　1.2糖尿病鼠 采用已成年（9-10w）雄性Sprague-Dawkey大鼠（体重250-300g），禁食一夜后，用美国Sigma公司出产的STZ（60mg/kg）溶于50mm枸橼酸钠缓冲液腹腔内注射，非糖尿病鼠仅注射等量缓冲液作对照。在注射后3d测体重和血糖浓度，从鼠的尾静脉抽血，血糖gt;250mg/dl确定为糖尿病鼠。 　　1.3检测方法 　　BDNF检测用酶联免疫吸附剂测试法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）。所有病例都于次晨空腹抽取静脉血3ml，离心（5000rpm）10min，4℃，吸取血浆储于-70℃待检。糖尿病鼠确定3w和10w后，腹腔内注射过量水合氯醛，施行断头术杀死，剥取视网膜，在冰冷缓冲液内冲洗，冷冻，于-70℃储存待用，对照鼠同样处置。在3w和10w后，对照/糖尿病鼠在分离视网膜后，从其心脏取血，冷储30min，离心，吸取血浆处于-70℃待检。检测视网膜内BDNF，需用超声波于溶化缓冲液内短期爆破，制成视网膜匀浆，离心10min，取其上清液做ELISA测试。 　　应用Western Blotting 法测试有/无糖尿病鼠视网膜内的BDNF蛋白水平。视网膜内的Caspase-3酶活性增强，应用Caspase-3色度计检测。 　　1.4统计学分析 用SPSS12.0软件包行统计学分析，定量资料用xplusmn;s描述，糖尿病与对照组用配对t检验，Plt;0.05显示差异有统