2005年度版中国药典《细菌内毒素检查法》.doc

凝胶法鲎试剂使用说明书【名称】通用名：鲎试剂 英文名：Tachypleus Amebocyte Lysate （简称TAL） 汉语拼音：hou shi ji 本品主要成份为B因子、C因子、凝固酶原、凝固蛋白原。 【用途】专用于细菌内毒素检查。 【性状】本品为白色或类白色冻干块或粉末，在水和生理盐水中易溶。 【原理】本品为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的无菌冷冻干燥品，在适宜的条件下（温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活鲎试剂中的凝固酶原，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。 【用法】 1．材料和设备 1.1选择所需的规格及灵敏度的鲎试剂、细菌内毒素工作品及细菌内毒素检查用水。 1.2准备若干支10ⅹ75mm玻璃反应试管（若使用0.1ml规格的鲎试剂无需准备此试管）、各种规格吸管或移液器或注射器、稀释内毒素用玻璃管、反应试管架、计时器、旋涡混合仪、恒温水浴箱（37±1℃）。 2．实验操作 2.1 稀释细菌内毒素工作品：取内毒素工作品（冻干品）1支，按细菌内毒素工作品使用说明书进行操作。 2.2 TAL试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于TAL试剂中，轻轻振摇至少30S至试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在短时间内使用（即配即用）。 2.3 检查操作 2.3.1 取分装有0.1ml 鲎试剂溶液的10×75mm试管或复溶后的0.1ml /支规格的鲎试剂原安瓿8支，其中2支作供试品管，2支作阴性对照管，2支作阳性对照管，2支作供试品阳性对照管。 2.3.2 每支供试品管加入0.1ml供试品；阴性对照管加入0.1ml检查用水；阳性对照管加入0.1ml浓度为2λ的内毒素溶液，供试品阳性对照管加入0.1ml含2λ内毒素的供试品。 2.3.3 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37±1℃的恒温器中孵育60±2分钟，然后取出观察结果。试管在孵育期间应避免任何的振动。 2.4 结果判断 2.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°时，管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱者为阳性，记录为（+）；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱者为阴性，记录为（－）。 2.4.2 阴性对照管均为阴性，阳性对照管、供试品阳性对照管均为阳性，试验有效，否则无效。 【注意事项】 1.本品仅用于体外细菌内毒素???测，禁止用于注射、口服等。 2. 试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素，常用的方法是在250℃干烤至少60min，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。 3.当使用新批号的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进行鲎试剂灵敏度复核试验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“鲎试剂灵敏度复核试验”。 4.有些物质可能引起假阳性或假阴性，所以第一次使用本品，供试品必须进行干扰实验，方法见《中华人民共和国药典》2005版中《细菌内毒素检查法》的“干扰试验”。 5.若阴性对照管为阳性，表明鲎试剂或检查用水或实验器具受到污染；若阳性对照管为阴性，表明鲎试剂或标准内毒素已失效，或鲎试剂的灵敏度及标准内毒素的效价标示不准确，或标准内毒素的稀释有误；供试品阳性对照管为阴性，表明反应体系内有抑制反应的干扰因素存在。 【贮藏条件】避光，阴凉处保存。 【批准文号】[88]卫药准字SJ-02号 【规??? 格】0.1ml、0.5ml、1ml、2ml 【包??? 装】安瓿10支装、抗生素瓶10瓶装 【产品批号】见外盒【生产日期】见外盒【有效期至】见外盒 【生产企业】公司名称：厦门鲎试剂实验厂有限公司 公司地址：厦门海沧新阳工业区新嘉路131号（361022） 销售电话：（0592）2085561、2095294销售传真：（0592）2095294网??? 址： HYPERLINK  2005年版中国药典 《细菌内毒素检查法》　　 ??? 本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 ??? 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 ??? 细菌内毒素的量用内毒素单位（EU）表示。 ??? 细菌内毒素国家标准品系自大肠杆菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 ??? 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及设置的各种阳性对照。 ??? 凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.015EU/ml的灭菌注射用水。定量测定用的细菌内毒素检查用水，其内毒素