SNT 1059.6-2008进出口食品中沙门氏菌属检测方法 垂直膜过滤法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1059.6-2008进出口食品中沙门氏菌属检测方法垂直膜过滤法Determination of Salmonellae in food for import and export-Vertical membrane filting method2008-07-17发布2009-02-01实施中华人民共和国发布专务店国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中沙门氏菌属检测方法垂直膜过滤法SN/T 1059. 6-2008**中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张0.5　字数９千字2008年9月第一版　2008年9月第一次印刷印数 1—2 000*书号：155066·2-19092 1SN/T 1059.6—2008言前本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴斌、李叶、贾赞、王刚、孙杰。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1059. 6--2008进出口食品中沙门氏菌属检测方法垂直膜过滤法1范围本标准规定了进出口食品中沙门氏菌属-垂直膜过滤检测方法。本标准适合于所有进出口食品中沙门氏菌属的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。SN0330出口食品中微生物学检验通则3方法原理本方法是基于垂直过滤的方式使测试样品通过包被有特别沙门氏菌抗体的膜，样品中的沙门氏菌抗原与膜上抗体结合，通过酶偶合物将抗原抗体结合物显色。若是阳性样品，试剂中央就会出现蓝色的圆点，反之为无色或淡蓝色的圆点。4设备和材料4.1滤器：套,备有预滤器。4.2滤膜：有机相或水相,孔径0.45 μm。4.3培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。4.4水浴箱:45℃±1℃,36℃±1℃。4.5吸管:1 mL、10 mL,含有刻度。4.6玻璃三角瓶和广口瓶:250 mL、500 mL。4.73玻璃试管:17 mmX170 mm。4.8 玻璃珠:5mm。4.9平Ⅲ:直径90 mm。4.10天平:感量 0.1g。4.11均质器和均质杯。5 培养基和试剂5.1缓冲蛋白陈增菌液:见第 A.1 章。5.2 RVS 肉汤:见第 A.2 章。5.3XLD琼脂平板：见第 A.3章。5.4HE琼脂平板：见第 A.4 章。5.5沙门氏菌检测试剂盒。注：第9章中使用的试剂盒为美国BLUSPOT公司产品，其他公司等效试剂盒的操作步骤可能略有不同，应经试验评估验证后使用。1 SN/T 1059. 6--20086抽样按SN0330规定执行。7样品制备和增菌培养7.1无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内。如有包装，则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。7.2固体、半固体食品：无菌操作取25g样品，放人装有225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的均质杯内，8000r/min～10000 r/min 均质1min，于37℃水浴培养 18 h士2h，进行前增菌；其后，移取0.1mL的前增菌液转种于盛有 10 mLRVS 肉汤的玻璃试管中，混合均匀，在 41.5℃士1℃培养24 h士3h，进行选择性增菌。7.3干燥或干粉食品：无菌操作瞰.25g样品，放人含适量玻璃珠的225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的玻璃三角瓶内，迅速振摇，幅度.30cm，7.s内振摇25:次；也可用机械振荡器振荡15s代替手摇，混匀样品后，37℃水浴培养18h士2-h,进行前增菌其后，移取0.1mL的前增菌液转种于盛有10mLRVS肉汤的玻璃试管中，混合均匀,在41.5℃士T℃培养24 h±3h,进行选择性增菌。7.4液体食品：用灭菌吸管吸取25mL样品，放人装有225mL灭菌缓冲蛋白陈水增菌液的玻璃三角瓶内，迅速振摇，幅度为30cm，7s内振摇.25次；也可用机械振荡器振荡15s代替手摇，混匀样品后，37℃水浴培养18h±2 h,进行前增菌；其后，移取01.mL_的前增菌液转种于盛有10mLRVS肉汤的玻璃试管中，混合均匀，在41.5吨士1.℃培养24h±3.h，进行选择性增菌。8分离培养8.1将增菌培养液摇匀，以无菌操作，用直径 3mm接种环挑取一环划线于 XLD 和 HE琼脂平板，并于36℃±1℃,培养24 h±3 h。8.2