常用实验试剂配制.doc

1 DEPC水(1‰) 1000ml 水 1ml DEPC 根据需要确定要配的体积，泡实验器具的DEPC水静止4小时后备用，泡24小时。配液体的DEPC水37℃过夜，送至高压，然后配相关溶液。 0.1M tris(ph 7.5) 12.114g tris 1000ml DEPC水 用HCL调ph至7.5，高压备用。 3 4%PFA的配制(ph 7.0) 40g PFA 1000ml 0.1m tris(DEPC水配制高压) 将溶液持续加热至60℃左右，搅拌之至完全溶解，注意温度不要超过65℃，否则PFA降解失效。 0.2% /0.1M tris 20ml 甘油 980ml 0.1Mtris 4 20XSSC Nacl 175.3g （ph 7.0） 柠檬酸钠 88.2g DEPC 1000ml 分别稀释至2XSSC和0.2XSSC备用5 HEPES 溶液 HEPES 23.8g (ph6.8-8.0) DEPC H2O 100ml 6 50X Denhaldt′s 液 聚蔗糖（Ficoll 400）0.2g 聚乙烯吡咯烷酮(polyvinypyrrolidone) 0.2g 牛血清蛋白（BSA） 0.2g DEPC 水 20ml 7 预杂交 buffer Deinoized formanmid 5ml 20X SSC 1.5ml 1M HEPES 0.5ml 50X Denhanldt′s液 1ml 龟精DNA 0.6ml(4ug/ul) DEPC 1.4ml 龟精DNA 要先95℃10-15min加热变性，随即冰浴。杂交buffer分装后-20℃保存。 Washing buffer (ph7.5) maleic acid 5.8g NACL 4.4g Tween（吐温） 1.5ml 定容至500ml溶质浓度最后分别为 0.1M maleic acid 0.15M nacl 0.3% Tween Maleic acid buffer (ph7.5) Maleic acid 5.8g Nacl 4.4g 定容至500ml 溶质的浓度最后分别为0.1M maleic acid 0.15M nacl Detection buffer (ph 9.5) 0.1M Tris-Hcl 7.9g (9.0g) 0.1M Nacl 2.9g 定容至500ml.使溶质的终浓度为0.1M Tris-Hcl ,0.1M nacl. blocking reagent(2-8℃保存) (bottle 5) 5g maleic acid buffer 50ml blocking solution 封闭液（新鲜配制） 1ml Maleic acid buffer 10ml 抗体（AP）10000rpm离心5min，吸上清，1：5000稀释，考虑先稀释100倍，用时再 稀释。LB培养基 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g Amp（100ng/ml） 1ml 加去离子水950ml搅拌使之完全溶解，用5mol/L的NaOH调PH值至7.0，定容至1L，高压蒸汽灭菌（15磅，1.034×105Pa）30min，4℃保存。 LB琼脂固体培养基 LB 500mL 琼脂粉 7.5g 高压蒸汽灭菌(15磅，1.034×105 Pa) 30 min，冷却至60℃，加入500(L 100mg/mL的氨苄青霉素（Amp），分铺20个平板。100 mg/mL氨苄青霉素（Amp） Amp 100mg