微生物检验培养基质量控制.ppt

微生物检验培养基质量控制 概念 细菌的生长繁殖需要一定的营养条件，为获取能力并维持其生长繁殖，细菌必须从外界吸取某些物质，包括水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子。不同种类的细菌对营养的要求也不同。 概念 培养基具有适合细菌生长需要的各种营养物质，包括微生物生长所需要的水分、碳源、氮源、无机盐及某些生长因子（维生素、辅酶）等。 除此以外，还具备待培养菌适宜生长的酸碱度。 培养基是人工配制的微生物生活环境 分类 分类 概 念 由于不同批次的蛋白胨、浸膏（粉）、琼脂、胆盐等成分的质量及酸碱度不同等，影响了培养基质量的稳定性 。 适宜的培养基制备方法、储存条件和质量控制是提高优质培养基的保证 主要内容 培养基购置、贮存、制备、使用注意事项 培养基质量控制 常用菌株保存方法 一、培养基购置、贮存、制备、使用注意事项 购置 依据ISO/IEC17025《检测和校准实验室能力的通用要求》，对培养基的供应企业进行评价后选择合格的供应商； 应选择产品市场信誉度高、有质量保证能力和服务保证能力的企业； 要求生产企业提供：培养基成分名称及产品编号、批号、使用前的pH、储藏信息和有效期、性能评价和所用测试菌株、技术数据清单、质控证书以及必要的安全/危害数据等材料。 验收 购买的培养基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应仔细核对生产企业提供的资料、培养基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。 每批培养基到货物后都应对培养基的质量进行检测，满足检测方法规定的要求后方可投入使用。 培养基的储存 干粉培养基应保存在阴凉干燥处，要避免阳光直射；未开瓶的培养基在室温下的最长保存2年，开瓶后的干粉培养基易吸湿，应注意防潮并在6个月内用完。应定期对储存中的培养基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，如果培养基发生结块、颜色异常和其他变质迹象就不能再使用。  培养基的制备 制备培养基用容器不得为铜锅或铁锅，以防有离子混入培养基中，影响微生物的生长。 所有容器在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。 容器的大小需大于复水后培养基总体积的2倍以上，避免在加热溶解过程中，培养基溢出。 培养基的制备 培养基制备用水中不能含有任何抑制或影响微生物生长的物质。 使用蒸馏水或与其同质的水。 最好不使用离子交换器生产的去离子水。  培养基的制备 每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录复制复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 培养基的制备 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方面军做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。 培养基所用化学药品均应是化学纯的 培养基的制备 在培养基分装灭菌前，各成分应溶解均匀。 在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。 培养基的制备 因培养基在加热消毒过程中、pH会有所变化，培养基各成分完全溶解后，应进行PH的初步调正。例如，牛肉浸液约可降低pH0.2，而肠浸液pH却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终PH，保证培养基的质量。 一般灭菌前比最终pH高0.2-0.3 。 用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL调整。 培养基的灭菌 已配制好的培养基必须立即灭菌，避免微生物生长繁殖而消耗养分，改变培养基的酸碱度。 高温可破坏培养基的营养成分，还会使琼脂的凝胶强度下降，因此必须严格控制灭菌温度和时间，并且不可重复灭菌。 高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定，并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证。 培养基的灭菌 灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度，避免长时间保存在灭菌锅内，造成过度灭菌，影响培养基的营养成分或选择性效果。 每批培养基制备好以后，应仔细检查一遍，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。 将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 培养基的储存 培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱 放置时间一般不宜超过一周。 倾注的平板培养基不宜超过3天。如果保存时间