丙型肝炎病毒NS3蛋白的原核表达及多克隆抗体制备.PDF

生 物 工 程 学 报 孙涛 等/丙型肝炎病毒NS3 蛋白的原核表达及多克隆抗体制备 711 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn May 25, 2015, 31(5): 711−721 DOI: 10.13345/j.cjb.140447 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 NS3 1 1 1,2 1,2 孙涛 ，杨光文 ，张金阳 ，夏雪山 1 650500 2 650500 , , , . NS3 . , 2015, 31(5): 711–721. Sun T, Yang GW, Zhang JY, et al. Prokaryotic expression of Hepatitis C Virus (HCV) NS3 protein and preparation of polyclonal antibody. Chin J Biotech, 2015, 31(5): 711–721. 摘 要: 提高对丙型肝炎患者实验室检测的灵敏度和特异性，对相关人群进行筛查和早期诊断，是控制丙型 肝炎病毒 (HCV) 流行与传播的有效措施。为了建立更为可靠的HCV 诊断方法，通过采用PCR 方法从J6/JFH1 2a 型病毒中克隆出HCV ns3 基因片段，将其连接到pET-28a 载体上，重组载体pET-28a-ns3 转化大肠杆菌BL21 (DE3) 后诱导表达，以 10% SDS进行鉴定，获得表达的NS3 重组蛋白分子量为72 kDa 。将纯化的NS3 蛋白免疫BALB/c 小鼠，第4 次免疫后采集血液并分离血清进行抗体活性鉴定，小鼠抗体效价为 1 ∶256 000 。 进一步的Western blotting 和间接免疫荧光结果显示，以重组NS3 蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体可以很好地识别 HCV 感染Huh7.5.1 细胞中的NS3 蛋白，为下一步开展单克隆抗体制备和检测试剂盒研制工作奠定了基础。 : 丙型肝炎病毒，B 细胞表位，NS3 蛋白，多克隆抗体 Received: September 13, 2014; Accepted: December 10, 2014 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No. , National Science and Technology Surport Program of China (No. 2014BAI01B01), Applied Basic Research Projects of Yunnan Province (No. KKS0201326002), Found for Fostering Talents of Kunming University of Science and Technology (No. KKSY201326085), Construction of Science and Technology Innovation Platform of Yunnan Province (No. 2012DA002). Corresponding author: Xueshan Xia. Tel: +86-871 E-mail: oliverxia2000@ Jinyang Zhang. Tel: +86-871 E-mail:zhangjinyangzjy@163.com (No. (No. 2014BAI01B01)