鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备.pdf

第29卷第5期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.29 No.5 2014年10月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Oct . 20 14 DOI:10.3969/ J.ISSN.2095-1388.2014.05.006 文章编号:2095-1388(2014)05-0454-05 鲤春病毒血症病毒糖蛋白的原核表达 及单克隆抗体的制备 张家林, 李强, 叶仕根, 李华 (大连海洋大学 辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室, 辽宁 大连 116023) 摘要:利用原核表达系统表达纯化鲤春病毒血症病毒 (SVCV) G蛋白, 制备特异性单克隆抗体, 扩增出 鲤春病毒0504分离株G基因片段, 并将其克隆至原核表达载体pET-28a (+) 中, 经诱导表达、 裂解离心 包涵体, 包涵体经His Bind亲和层析柱纯化及尿素浓度梯度复性后, 作为抗原免疫Balb/ c小鼠, 制备单克 隆抗体。 结果表明: 成功筛选出2株稳定分泌G蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为1C5、 2D5, 经 Western-Blot检测表明, 制备的单克隆抗体具有良好的特异性。 本研究中成功制备的抗G蛋白单克隆抗体, 可为建立新型鲤春病毒检测方法提供工具。 关键词:鲤春病毒血症病毒 (SVCV); G蛋白; 原核表达; 单克隆抗体 中图分类号: Q786摇 摇 摇 摇 文献标志码: A [5] [6] 摇 摇 鲤春病毒血症 (Spring viremia of carp, SVC) 生中和抗体, 参与病毒的感染 、 免疫识别 和 [7] 是由鲤春病毒血症病毒 (Spring viremia of carp vi鄄 介导病毒内吞 等, 可作为 SVCV 免疫诊断的抗 rus, SVCV) 引发的危害鲤科鱼类的一种急性、 高 原, 同时也是抗病毒药物作用的理想靶点。 本研究 致死性的传染病, 目前在欧洲、 美洲、 亚洲广泛传 中, 选取并扩增鲤春病毒血症病毒 (简称为鲤春 播, 现已造成了巨大的经济损失, 世界动物卫生组 病毒, 下同) G基因片段, 原核重组表达了G 蛋 织 (World Organisation for Animal Health, OIE) 已 白, 继而制备了抗 G 蛋白的单克隆抗体, 并对单 [1] 将其列为必须申报的疾病 , 中国在2008年颁布 抗进行了初步鉴定, 旨在为建立新型SVCV免疫学 [2] 的动物疫病名录中将其列为一类动物疫病 。 近 诊断方法提供工具。 年来, 国内外很多学者致力于研究更加快速、 准确 1摇 材料与方法 地检测SVCV 的方法。 中国应用较多的检测方法有 套式RT-PCR、 荧光定量PCR、 LAMP等, 相关免 1郾1摇 材料 [3] 疫学检测方法尚未成熟 。 而OIE推荐的SVCV检 测方法是建立在单克隆抗体基础上的间接免疫荧光 1郾1郾1摇 病毒、 质粒和菌株摇 SVCV 0504 毒株为辽 (IFA) 和酶联免