HPLC法测定药渣中维生素B12残留量.pdf

10 试验研究 殖与饲料2017 年第4 期 · · HPLC 法测定药渣中维生素B12 残留量 张金霞 史慧琴 李 谦 徐 强 宁夏金维制药股份有限公司，银川 750101 摘要 建立了高效液相色谱法测定药渣中维生素B12 残留量的检测方法。采用紫外检测器，调节波长 361 nm ，柱温35 ℃，用28% 甲醇水为流动相，以0.8 mL/min 的流速进行洗脱，以外标法计算含量。药渣中维 生素B12 残留含量在2.0 ～12.0 μg/mL 范围内与峰面积具有良好的线性关系，线性方程为 =30 431 +250.87 ， 相关系数 2 为0.999 8 ，专属性和回收试验符合要求。该方法简便、灵敏、准确，适用于药渣中维生素B12 残留 量的测定。 关键词 HPLC 法；维生素B12 ；药渣 在维生素B12 等药品发酵生产中能产生大量菌 用水稀释定容至刻度，摇匀、备用。 渣，作为抗生素菌渣通常需要做无害化处理，而维 ②供试液的制备。称2 ～3 g 菌渣到25 mL 容 生素B 发酵菌渣属于环境低危害性，并且由于药 然 加冰乙 12 量瓶中，加水至约 10 mL ，超声波震荡， 渣中含有一定量的残留维生素B 可以用做饲料添 （ 加 12 酸 1 mL ，亚硝酸钠 12.5% ）1 mL ， 2 ～3 滴消泡 [1] 、滤纸过 加成分或菌体蛋白进行再加工 。因此测定药渣中 剂，摇匀，在沸水中加热30 min ，冷却、定容 维生素B12 残留量对产品再加工的质量和安全性非 滤，滤液过0.45 um 滤球，取滤液。 常重要。 3 ）系统适用性试验。取上述标准工作液20 μL ，连续进样5 次。考察理论塔板数≥2 000 、拖尾 1 仪器与试剂 因子小于1.5 ，峰面积相对标准偏差应小于2.0% 。 1）岛津LC20 10 高效液相色谱仪，日本岛津。 4 ）线性关系考察。分别精密吸取上述贮备液 购自北京普析通 TU-1900 紫外- 可见分光光度计， 0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0 、1.2 mL 置于 100 mL 棕色容 用仪器有限公司。 量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀。制成浓度分 2 ）维生素B12 对照品（购自中国药品生物制品 别为 2.0 、4.0 、6.0 、8.0 、10.0 、12.0 μg/mL 的溶液， 检定所），甲醇（购自天津康巢生物医药有限公司）， 分别取上述溶液20 μL 注入液相色谱仪，记录峰 冰乙酸、亚硝酸钠（购自天津市凯通化学试剂有限 面积，以对照品溶液浓度为横坐标，维生素B12 峰 公司）。 面积为纵坐标绘制标准曲线。相关系数 2 应大于 0.999 。 2 试验方法 5 ）精