伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备与其在糖蛋白核糖核酸酶B结构分析中的应用.pdf

2006年 9 月 色 谱 V o l. 24 N o. 5 S ep tem b e r 2006 C h in ese J ou rn a l of C h rom a tog raph y 425 ～43 1 伴刀豆球蛋白亲和色谱柱的制备及其在糖蛋白 核糖核酸酶 B 结构分析中的应用 陈 　刚, 　白　泉 , 　耿信笃 (西北大学现代分离科学研究所 现代分离科学陕西省重点实验室 , 陕西 西安 710069) ( ) 摘要 :通过对硅胶基质进行化学改性键合伴刀豆球蛋白 C on A , 制备了对糖蛋白具有特异亲和作用的亲和色谱 固定相; 该固定相非特异性吸附弱 ,对于糖蛋白和糖肽的分离效果良好 。对亲和色谱的分离条件进行了优化 , 以标 准糖蛋白核糖核酸酶 B ( RN a se B )为模型 ,对其进行了纯化; 用糖苷酶切除糖链 , 并对切除糖链前后的 RN a se B 用 ( ) 胰蛋白酶酶解; 用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 MALD ITO F M S 对亲和色谱分离得到的糖蛋白、糖链及 糖肽进行了分析 ,确定了 RN a se B 的一级结构 、糖含量 、糖基化位点及糖连接方式 。该方法快速准确 , 适于糖蛋白 和糖肽的分离表征 。将其应用于血清中糖蛋白及酶解后血清中糖肽的分离富集 , 取得了很好的效果 。 关键词 :伴刀豆球蛋白; 亲和色谱; 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱; 糖蛋白; 核糖核酸酶 B ; 蛋白质组学 中图分类号 : O 658　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 100087 13 ( 2006)　栏 目类别 :研究论文 P r ep a r a t io n o f a C o n ca n a v a lin A Im m o b iliz e d A ff in it y C o lum n a n d I t s A p p lica t io n in t h e S t ru c t u r a l A n a ly s is o f R ib o n u c le a s e B CH EN G an g, BA I Q u an , G EN G X in du ( In s t i tu te of M od er n Sep a r a t ion Sc ien ce, Key L a bor a tor y of M oder n Sep a r a t ion Sc ien ce in Sh a a n x i P r ov in ce, N or thw es t U n iver s i ty , X i ’a n 710069, Ch in a ) A b s