基因工程和细胞工程.ppt

专题八现代生物科技专题;（2）DNA连接酶——“分子缝合针”：把两条DNA之间的缝隙“缝合”起来;↓;转基因植物

转基因动物

基因药物

基因治疗;（2）流程：;二、细胞工程;3.植物体细胞杂交

（1）过程：酶解去壁→→组织培养

（2）意义：克服的障碍，培育出自然

界中没有的优良品种;（2）应用：制备 ;7.细胞核移植

过程：

应用：;考点一基因工程的详细操作流程和应用

1.理解基因工程的工具

（1）工具酶

①限制性核酸内切酶：只能在特定的部位进行切割，切割位点一般具有反向反复序列。作用成果：形成黏性末端或平末端。作用实质：使特定部位的两核苷酸之间的磷酸二酯键断开。

②DNA连接酶作用实质：两类DNA连接酶都是将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。;（2）载??

①种类：常用的载体是质粒，大肠杆菌、枯草杆菌、

土壤农杆菌等细菌中均有质粒。

②作为载体应具有的条件

a.对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。

b.具有标识基因，以便于鉴定目的基因与否进入受体

细胞。

c.能自我复制，通过复制进行基因扩增，否则也许会

使重组DNA丢失。

d.具有一种至多种酶切位点，以便于目的基因的插入。

e.载体DNA分子大小适合，以以便操作。;（2）基因体现载体的构建

①用一定的限制酶切割质粒，使其出现一种有黏性末端或平末端的切口。

②用同种限制酶切割目的基因，产生相似的黏性末端或平末端。

③用DNA连接酶将质粒与目的基因重新连接形成重组质粒。;（4）目的基因的检测与鉴定;尤其提醒目的基因的检测也可运用质粒中的标识基因，如大肠杆菌质粒中含抗青霉素基因，把某种转基因生物放入带有青霉素的培养基中培养。若有抗性，阐明导入成功；若无抗性，阐明导入失败。;区别;（1）在这项“基因工程”的操作中，目的基因是 ，采用绿色荧光蛋白基因的重要目的是 。

（2）两基因组合在导入受体细胞前必须进行的环节是：将其与由细菌体内获得的进行切割处理，以保证有相似的，???拼接成。假如引入的受体细胞是细菌，还要对细菌作处理。

（3）在基因工程中受体常用微生物，为何？

。

（4）“蜘蛛拖牵丝基因”成功体现的标志是。

（5）带有“绿色荧光蛋白基因”的转基因蚕，与否能引起生态安全性问题？请分析原因。

。;解析从题目提供的信息不难看出，蜘蛛纺绩器拖牵丝的直丝强度比蚕丝要大，因此拖牵丝基因是目的基因，绿色荧光蛋白基因是作为标识基因。在形成重组DNA时，首先要用同一种限制性内切酶切割目的基因和质粒，得到相似的黏性末端，再用DNA连接酶形成重组质粒，假如要将重组质粒导入细菌体内，必须对细菌细胞壁用氯化钙处理，增长其通透性，便于重组质粒进入细菌体内。蜘蛛拖牵丝基因成功体现时，能产生高强度的丝，转基因生物的安全性问题正在探索中。;答案（1）拖牵丝基因作为标识（基因）（2）质粒黏性末端重组质粒（或重组DNA）CaCl2（或提高膜的通透性）（3）微生物的繁殖速度快（4）产生高强度的丝（5）也许。转基因蚕扩散进入自然生态系统，与同种的野生蚕杂交后，使野生蚕也具有转基因，也许会威胁到原有物种，引起生态危机;（08·广东卷）天然酿酒酵母菌一般缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被运用。研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接运用淀粉产生酒精。请回答问题：

（1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是 ，用 将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，下一步将该DNA分子 ，以完毕工程菌的构建。

（2）若要鉴定淀粉酶基因与否插入酿酒酵母菌，可采用的检测措施是 ；若要鉴定淀粉酶基因与否翻译成淀粉酶，可采用 检测；将该工程菌;接种在含淀粉的固体平板培养基上，培养一定期间后，加入碘液，工程菌周围出现透明圈，该现象发生的原因是 。;交法来检测特定的蛋白质。淀粉酶可以使淀粉水解，因此加入碘液后培养基中淀粉被水解的区域不会变蓝。

答案（1）限制酶（限制性核酸内切酶）DNA连接酶导入受体细胞（2）DNA分子杂交技术抗原—抗体杂交或淀粉酶活性该工程菌产生的淀粉酶可分泌至培养基，水解淀粉后的区