苹果树腐烂病致病菌和拮抗菌的筛选课件.ppt

关于苹果树腐烂菌的研究 报告人：王娟娟 实验材料及仪器 PDA培养基 LB培养基 牛肉膏蛋白胨 培养基腐烂的苹果枝 健康的苹果枝 摇床 致病菌的筛选 灭菌培养皿，置于湿纱布上，用无菌操作法向培养皿中加入25％乳酸1~2滴， 然后将冷却至50℃左右的PDA培养基倒入培养皿中，每皿倒10~15ml，轻轻摇动 成为平面。取采集到的苹果腐烂病病组织，选择典型单个病斑，用剪刀从病斑边缘 (病健交界处)剪取小块病组织数块，放入70％酒精浸3s，移入O．1％升汞液中进行表 面消毒，放入灭菌水中漂洗5次，除去残留的消毒剂。将病组织移至PDA平板培养基上， 每皿4块。重复多次，筛出纯菌。 病原菌的鉴定 将获得致病菌纯培养物分别移植在PDA、苹果树枝条汁培养基，28℃恒温培 养。每隔3d观察一次菌落培养性状，色泽．测定菌落生长速度，并在低倍显微镜观察真菌菌丝，进行初步判定。 致病菌的再分离 采用常规组织分离法从接种发病 枝条分离致病菌，在PDA培养基平板上获得纯培养，并与原接种致病菌进行比较． 分离菌的回接及致病性测定 拮抗菌的筛选 从土壤中富集细菌，然后在肉膏蛋白胨培养基上培养，根据其形态、菌落初步筛出不同的菌，进一步进行分离纯化。 把土壤中筛出的菌和致病菌共同培养，观察数天，看是否出现抑菌圈，以及抑菌圈的大小。重复该步骤。 实验预期结果 回接及致病性的预测： 用分离的致病菌接种苹果的两年生枝段，均能发病，表现与田间相同的症状。致病菌在接种 几天后开始显症，此后病斑向四周扩展，病部开始有黑色小点出现，对照均未感病。 拮抗菌的筛选的预测： 会出现大小不同的抑菌圈 感谢您的关注！ * * * * * * * * * * * * * * 实验展望及目的 实验材料及仪器 实验方法及步骤 实验预期结果 苹果树腐烂病(apple tree valsa canker)是我国各苹果产区普遍发生且为害严重的病害，由多种Cytospora spp．引起。但由于我国病原菌的种类及其致病性分化情况至今尚不清楚，严重影响了人们对病害发生和流行规律的认识，制约了对病害预测、预报和寄主抗病性的研究， 致使病害防治缺乏相应对策。因此，本文选用在PDA上培养性状差异明显的若干株腐烂病菌分离株为对象，对其生物学特性与致病性的关系进行了研究。 实验目的 致病菌的筛选1 l 病原菌的鉴定2 分离菌的回接及致病性测定 致病菌的再分离 拮抗菌的筛选 ThemeGallery is a Design Digital Content Contents mall developed by Guild Design Inc. 第一步，选取技条：分别取苹果无病2a生枝条．截成20Ca长的 小段，每个菌种用30段． 第二步，消毒：将切成的小段用7505酒精表面消毒，再 用无菌水冲洗． 第三步，接种：先用烙铁把切成的小段烫伤，再向苹果枝条小段 皮内接入适量的分离纯化苗丝． 第四步，保湿：把接种的枝条小段与对照一同放 入保湿缸内，置于25℃恒温箱内培养 第五步，观察记录：每天观察同时记载发 病情况。以烫伤不接菌的枝条小段为对照．统计发病率。 * * * * * * * *