SN_T 4283.3-2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法 第3部分：7种呼吸道病毒.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4283.3--2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法第3部分：7种呼吸道病毒Test method of microplate gene chip at frontier port-Part 3: Seven respiratory viruses2016-01-01实施2015-05-26 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4283.3—2015前言SN/T4283《国境口岸微孔板基因芯片检测方法》为系列标准，分为六个部分：第1部分；通用技术规程；一第 2部分:结核分枝杆菌及 katG和 rpoB耐药变异基因;第3部分：7种呼吸道病毒；—第 4部分：肠道病毒及肠道病毒 71型、柯萨奇病毒 A16 型;一第5部分：肺炎支原体、肺炎衣原体及嗜肺军团菌；第6部分：12种食源性致病菌。本部分为SN/T4283的第3部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、清华大学深圳研究生院、珠海精标仪器有限公司。本部分主要起草人：史蕾、马岚、林勤丰、顾大勇、刘君、刘春晓、赵芳、赵纯中、何建安、徐云庆、李永进。1 SN/T 4283.3—2015国境口岸微孔板基因芯片检测方法第3部分：7种呼吸道病毒1范围SN/T 4283的本部分规定了国境口岸 A、B型流感病毒，副流感病毒 I、I、Ⅲ型，呼吸道融合病毒以及腺病毒共7种呼吸道病毒的微孔板基因芯片检测方法。本部分适用于在国境口岸实验室采用微孔板基因芯片技术对上述7种呼吸道病毒进行检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求SN/T2609国境口岸流感、副流感、呼吸道合胞病毒的酶联免疫吸附试验检测方法SN/T2752.4-—2011　卫生检疫人员的自我防护规范　第4部分：实验室人员SN/T4283.1国境口岸微孔板芯片检测方法第1部分：通用技术规程WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则3术语和定义SN/T4283.1和SN/T2609界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1呼吸道病毒respiratory viruses以呼吸道为侵入门户，先在呼吸道黏膜上皮细胞中增殖并引起呼吸道局部感染或呼吸道以外组织器官产生病变的病毒统称。3.2 腺病毒adenovirus一种无包膜的双链DNA病毒，对呼吸道、胃肠道、尿道和膀胱、眼、肝脏等均可感染，其呼吸道感染的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等。4缩略语SN/T4283.1界定的以及下列缩略语适用于本文件。IAV:A 型流感病毒(infiuenza A virus)IBV:B型流感病毒(influenza B virus)PIV:副流感病毒(parainfluenza virus)ADV:腺病毒(adenovirus)RSV;呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus) SN/T 4283.3-20155生物安全防护要求5.1实验室应遵循GB19489和WS233对应的生物安全要求。5.2实验人员的防护遵循SN/T2752.4-2011的要求。6主要设备和试剂6.1主要设备：基因芯片点样仪、芯片杂交仪、芯片清洗显色仪、生物芯片全自动扫描判读仪、PCR仪、生物安全柜、离心机、移液器、恒温水浴锅等。6.2主要试剂：呼吸道病毒微孔板基因芯片检测试剂盒或自行设置的呼吸道病毒微孔板基因芯片检测试剂（相关引物及探针序列参见附录A）。7检测流程7.1样品核酸的提取使用Roche High Pure Viral Nucleic Acid Kit 提取样品核酸，可同时提取样品中病毒 RNA和 DNA。7.2RT-PCR 扩增反应7.2.1可使用试剂盒附带的试剂按说明书要求配置RT-PCR反应体系，或自行配置：每个样品进行两管反应,取适量 RNase-free PCR管，分别标示样品编号与管号。每个样品的 1号管中配置 25 μL RT-PCR反应体系:10X缓冲液 2.5 μL,dNTPs(各 5 μmol/L)2 μL,MgCl2（25 mmol/L)2 μL,所有上下游引物（各5 μmol/I)混合液2μL,Taq DNA聚合酶0.25μL，AMV反转录酶0.25μL，模板核酸 5μl，ddH²O11μL。每个样品的 2号管中配置 25 μL RT-PCR 反