人教版选修3专题1第二节基因工程的基本操作程序（共40张PPT）.ppt

　①用一定的限制性核酸内切酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口； ②用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端； ③将切下的目的基因片段，插入到质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，使两者结合成重组质粒(重组DNA)。 五、目的基因的表达 检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因（关键） 检测目的基因是否转录出mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质 D 将目的基因转入植物细胞最常用的方法是： 显微注射 基因枪法 花粉管通道发 农杆菌转化法 D 获得转基因动物常用的受体细胞是： 受精卵细胞 皮肤细胞 卵细胞 造血干细胞 A 质粒上有标记基因如上图所示，通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，下表是外源基因插入位置（插入点a、b、c），请根据表中提供的细菌生长情况，推测①②③三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是 A.①是c；②是b；③是c B.①是a和b；②是a；③是bC.①是a和b;②是b；③是a D.①是c；②是a；③是b A 直接导入法有电击、显微注射、直接吸收、基因枪等方法。 1、电击法：借助电击仪高压脉冲把目的基因打入宿主细胞。 2、显微注射法：利用微量注射器在显微镜下直接把目的基因注入宿主细胞。 3、直接吸收法：把目的基因和宿主细胞混在一起，让其吸收。 4、基因枪法：在金属微粒上涂一层目的基因，然后发射到宿主细胞中。 间接导入法常用的载体是质粒、λ噬菌体、科斯质粒。 1、质粒是细菌染色体DNA以外的环状双链DNA分子，它能自我复制，也可整合到细胞染色体DNA中与其一起表达。质粒通常还含有标记基因，这可以从细胞的表型特征来识别。 2、λ噬菌体是一种细菌病毒，其环状双链DNA可以作为目的基因的载体。 3、科斯质粒是一种杂种质粒，含有质粒和λ噬菌体的部分顺序，很适合用作真核生物基因的载体。 （1）内容： （2）常用的技术： ①DNA分子杂交技术－－DNA与DNA杂交 ②分子杂交技术－－DNA与RNA杂交 ③蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交 * 如何将抗虫基因移植到棉花的细胞中，使棉花具有抗虫害的作用？ 讨论： 苏云金芽孢杆菌（有抗虫特性） 提取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 普通棉花植株 导入 基因工程培育抗虫棉 目的基因的获得 将目的基因导入受体细胞 基因表达载体的构建 重组质粒（重组DNA分子） 抗虫性鉴定 抗虫棉花植株 目的基因的检测与鉴定 第二节 基因工程的基本操作程序 1.目的基因（外源基因）： 所感兴趣的基因 一、目的基因的获取 　 目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。 2、获得目的基因的方法 人工合成 利用PCR技术扩增 已知序列 未知序列 从基因文库获得 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 （1）人工合成 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 推测 化学合成 ①化学合成法： 目的基因的mRNA 单链DNA (cDNA） 双链DNA (即目的基因) 逆转录（逆转录酶） 合成（DNA聚合酶） ② 逆转录法： 当基因比较小、核苷酸序列已知或蛋白质的氨基酸序列可以测得时 序列已知 PCR (polymerase chain reaction) ——聚合酶链式反应 （2）利用PCR技术扩增目的基因 根据DNA双链复制的基本原理，模拟体内复制过程，在生物体外复制特定DNA片段的技术 体内 PCR（体外） 双链DNA 双链DNA 单链DNA 解旋 （解旋酶） 单链DNA 高温变性 （加热至90～95 ℃ ） 合成RNA引物 （RNA聚合酶） 低温退火（复性） （冷却至55～60 ℃ ） 引物与单链互补结合 适温延伸 （加热至70～75 ℃ ） 双链子DNA 热稳定ＤＮＡ聚合酶 分别以DNA的两条链为模板合成子链 DNA聚合酶 双链子DNA 过程 一 次 性 吸液枪头 调节轮 卸枪头按钮 推动按钮 卸枪头器 微量移液器 利用PCR技术扩增目的基因 四种脱氧核苷酸(dNTP) 一对引物： 热稳定DNA聚合酶(Taq 酶） 模板DNA( 需含有目的基因 ) Mg2+(激活剂) 条件： 缓冲溶液 与目的基因的起始段互补 有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 前提： 2n 循环n次后，共有DNA分子： （3）从基因文库中获取目的基因 基因组文库 cDNA文库 过程 提取基因组DNA 限制性核酸内切酶酶切 与运载体连接 导入受体细胞 mRNA cDNA(单链） 双