基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测型糖尿病患者visfatin基因多态性.doc

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测2型糖尿病患者visfatin基因多态性 ?188?广东医学2011年1月第32卷第2期GuangdongMedicalJourn~Jan.2011,Vo1.32,No.2 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法检测 2型糖尿病患者visfatin基因多态性 李素芳,任伟,李金超,刘静婧,郑晓雅 重庆医科大学附属第一医院内分泌科(重庆400016) 【摘要】目的探讨脂肪因子visfatin基因rs9770242位点多态性与中国重庆地区2型糖尿病(T2DM)患者 是否存在关联.方法运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI—TOF—MS)技术在344例无亲缘关系 的中国重庆地区人群(2型糖尿病患者206例,对照组138例)中对visfatinrs9770242多态性进行检测.结果 (1)1,2DM组体质指数,腰臀比,收缩压,舒张压,空腹血糖,30,60,120min血糖,空腹胰岛素,胆固醇,三酰甘油,低 密度脂蛋白,胰岛素抵抗指数均较对照组高,而30,60min胰岛素,高密度脂蛋白,胰岛素分泌指数降低(Plt; 0.01).(2)visfatinrs9770242位点检出两种基因型A/A和C/A,两种基因型频率为98.8%和1.2%,两组C/A频 率分别为0.5%和1.4%,两组差异无统计学意义.(3)logistic回归分析表明,空腹血糖,120min血糖,体质指数 是T2DM的危险因素.结论visfatin基因rs9770242位点多态性与重庆地区2型糖尿病发病无明显相关性. 【关键词】2型糖尿病;visfatini基因多态性 2型糖尿病(T2DM)是一种严重的代谢紊乱性疾 病,已成为发达国家中继心血管和肿瘤之后的第3大 非传染性疾病,其病因复杂,遗传因素占有重要的地 位.内脏脂肪素(visfatin)是一种由内脏脂肪组织分泌 的脂肪细胞因子,具有类似胰岛素降血糖的活性,并受 血糖的调控,而且可促进313一Ll脂肪细胞和L6肌细 胞对葡萄糖的摄取….最近新的研究显示,visfatin还 可通过自分泌的形式提高肝细胞对胰岛素效应的敏感 性.这些作用提示visfatin与2型糖尿病的发病机 制存在着潜在的联系.目前有关visfatin基因 rs9770242位点变异与糖尿病的关系,所得结论尚不完 全一致.本研究利用基质辅助激光解吸电离飞行时间 质谱(MALDI—TOF—MS)技术对visfatin基因 rs9770242位点进行多态性检测,以期探讨基因变异的 频率与2型糖尿病的关系. 1资料与方法 1.1一般资料选取2009年2月在重庆医科大 学附属第一医院门诊体检者344例,男189例,女155 例,平均年龄(53±l3)岁,均为重庆地区汉族居民,相 互无血缘关系.所有受试者均通过75g葡萄糖耐量 试验判断糖耐量状态,将研究对象分为2型糖尿病组 和对照组.T2DM组共206例,男125例,女8l例;年 龄23～87岁;患者均为新诊断且未曾接受任何治疗 (含饮食,运动,药物等治疗),排除甲亢及其他影响糖 代谢的内分泌及免疫系统疾病者.对照组共138例, 男54例,女84例;年龄19～79岁;均为糖耐量正常, 无高血压,冠心病,高脂血症和糖尿病家族病史.两组 间年龄(t=1.522),性别(=0.698)差异无统计学意 义(均Pgt;0.05). 1.2临床资料的收集和生化指标的测定所有受试 △通信作者.E—mail:weiren1967@yahu.eon1.ell 者均空腹10h以上,采空腹静脉血标本用于血糖,血 脂的测定,血糖用葡萄糖氧化酶法,血脂用酶学方法. 之后口服75g葡萄糖,然后于30,60和120min分别 采集静脉血标本,测定各时点血糖,胰岛素水平,胰岛 素用化学发光法.其间询问病史,测定身高,体重,腰 围,臀围,血压等人体测量学指标;计算体质指数 (BMI),腰臀比(WHR)等. 1.3基因组DNA的提取和SNPs分型 1.3.1总DNA的提取EDTA抗凝血0.5mL,蛋白 酶K裂解法提取外周血DNA,紫外分光光度计检测 OD260280在1.6～1.8,表明样品纯度较高,置于 一 80%冰箱保存备用.之后试验步骤交由上海邃志生 物科技有限公司完成. 1.3.2PCR扩增及纯化从PubMed中检索visfatin 基因全序列,利用AssayDesigner(Sequenom)软件包设 计引物1对,引物序列分别为5一ACGTrGGAT— GAACGGGCCAAGCCTITrGACA～3和5一ACGTFG- GATGCCAACTCGTI’YCCCAGGA33”一3.PCR反应体 系:所有需要分型的DNA样本都稀释到5ng/L,取 1txLDNA样本,将其与0.95IxL水,0.