CN201010523452.X-一种草菇和杏鲍菇原生质体融合的方法.pdf
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原生质体细胞融合方法.PPT
海藻细胞培养 单细胞分离和培养 细胞悬浮培养 原生质体分离和培养 单细胞分离 机械法 最早采用 多以大型海藻的叶状体为材料 酶解法 应用广泛 适用于海藻的细胞和原生质体分离 培养物分离法 各种单细胞分离方法比较 机械法 细胞不受酶影响，无需质壁分离处理 产率低，不适用于排列紧密的海藻叶状体 酶解法 操作简单，产率高，应用广泛 培养物分离法 处理温和，产率较高，周期较长 常用于藻体细胞的分离 单细胞固体培养法 平板培养法(plante culture) 单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。 看护培养法(nurse culture) 用一块活跃生长
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一种梨叶原生质体的提取方法.pdf
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 113388568 A
(43)申请公布日 2021.09.14
(21)申请号 202110725839.1
(22)申请日 2021.06.29
(71)申请人 河北农业大学
地址
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植物原生质体的融合.ppt
第九章 植物原生质体融合技术 植物原生质体融合又称体细胞杂交，是指将 不同来源的植物原生质体(除去细胞壁的细胞)相 融合并使之分化再生、形成新物种或新品种的技 术。 一般先将两种不同植物的体细胞经酶消化， 除去细胞壁，得到原生质体，而后通过物理或化 学方法诱导其细胞融合形成杂种细胞，继而再以 适当的技术进行杂种细胞的分检和培养，促使杂 种细胞分裂形成细胞团、愈伤组织直至杂种植 株，从而实现基因在远缘物种间的转移。 一、植物原生质体的制备 1. 植物原生质体的分离 (1) 机械分离法 细胞在高渗糖溶液中发生轻微质壁分离，原 生质收缩成球状后，再用机械法
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植物原生质体的融合.pdf
14.3植物原生质体的融合
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体细胞杂交的重要性
实现远缘遗传重组，创造新遗传种质。通过原生质体融合在细胞水平上
进行无性杂交，绕过有性过程这一环节，有可能克服上述障碍，培育出
自然条件下不能得到、具有各种优良性状的作物新品种。
实现核质互作的遗传性状组合，特别是双亲质基因组（线粒体基因、叶
绿体基因）的组合，将位于细胞质的雄性不育性、抗病性、杀虫剂抗性
遗传给子代，产生细胞质杂种。
体细胞杂交的类型
第一类为常用的体细胞杂交
第二类是配子间细胞杂交
第三类是配子－体细胞杂交
植物原生质体融合的过程
原生质体的制备
融合细胞的诱导
杂种细胞的筛选和培
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原生质体融合育种.docx
原生质体融合育种摘要原生质体融合育种克服了远缘杂交不亲和的障碍，可以提高重组频率，使得遗传物质的交换、传递更完整，成为微生物育种的一种重要方式。其过程包括原生质体制备和再生、原生质体融合以及融合体检出等步骤。在每个步骤中均要考虑到其应注意的因素，从而提高原生质体育种的效率，达到快速育种的目的。因原生质体融合育种的优势，其在多功能菌种选育、工程菌选育和工业生产育种等方面应用广泛。关键词原生质体制备 融合育种 原生质体再生 融合体检出引言传统的杂交育种具有一定的局限性，需要受到亲和力的影响，并且要求亲本有性的分化，而原生质体育种则克服了这些缺点。当细菌细胞壁被剥离，剩下由原生质膜包围的原生质部分称
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原生质体培养与融合.docx
原生质体培养与融合
原生质体培养与融合
植物原生质体培养
?原生质体培养发展简史及其意义?原生质体分离及培养
?原生质体融合
原生质体（Protoplast）?1880, Hanstein：质壁分离时，能够与细胞壁分开的那部分细胞物质。
?含义：去掉细胞壁的由质膜包裹、具有生活
力的裸露细胞。
植物细胞模式图
质膜液泡细胞核内质网微管细胞壁
细胞壁由三种主要成分构成
纤维素25-50%、半纤维素53%和果胶5%
一、原生质体培养发展简史及其意义
?1892年：Klercker机械法(利刃)分
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原生质体的培养与融合.ppt
1973年：Keller用pH10.5的50 mM CaCl2溶液在37℃时，诱发烟草叶肉原生质体融合。 优点：杂种产量高。 不足：高pH值对细胞有毒害作用。 （二）高pH-高Ca离子法 本文档共49页；当前第30页；编辑于星期一\14点1分 PEG法特点： 融合频率高 可重复性强 诱发融合无特异性 毒性较低 植物+植物 植物+动物 动物+酵母 Polyethylene Glycol（聚乙二醇） （三）PEG法 本文档共49页；当前第31页；编辑于星期一\14点1分 PEG法原理 PEG是一种带负电性的高分子化合物，在原生质体融合中起到一种桥梁作用，可以使原生质体凝聚。在洗脱过
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原生质体的分离与融合.ppt
原生质体的分离与融合什么是原生质体01原生质体，是指出去细胞壁的植物细胞的部分。03在适当条件下，原生质体可以成功培养长出细胞壁，并通过细胞分裂。02由Hanstein1980年提出04原生质体不仅对细胞融合研究有价值，且能通过裸露的质膜获得外源DNA、细胞器、细菌和病毒颗粒等。一、原生质体分离保证原生质体不受伤害并不损害其再生能力。原生质体分离的基本原则是只有储藏组织中较大的、高度液泡化的细胞才能用于分离原生质体，如洋葱球茎鳞片、萝卜根、甜菜根等；缺点：产量低；方法枯燥无力；因破碎细胞释放物的存在，原生质体活力低。1.机械法Cocking在1960年证实了可用酶分离原生质体。Takabe等1
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原生质体的分离与融合.ppt
关于原生质体的分离与融合第1页，共37页，星期日，2025年，2月5日什么是原生质体原生质体，是指出去细胞壁的植物细胞的部分。由Hanstein1980年提出在适当条件下，原生质体可以成功培养长出细胞壁，并通过细胞分裂。原生质体不仅对细胞融合研究有价值，且能通过裸露的质膜获得外源DNA、细胞器、细菌和病毒颗粒等。第2页，共37页，星期日，2025年，2月5日一、原生质体分离原生质体分离的基本原则是保证原生质体不受伤害并不损害其再生能力。1.机械法只有储藏组织中较大的、高度液泡化的细胞才能用于分离原生质体，如洋葱球茎鳞片、萝卜根、甜菜根等；缺点：产量低；方法枯燥无力；因破碎细胞释放物的存在，原生
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原生质体培养方法.ppt
原生质体培养方法 液体浅层培养 固-液体双层培养 固体平板培养 琼脂糖珠培养 液体浅层培养:Liquid thin layer culture 将含有原生质体的培养液在培养皿底部铺一薄层，封口后进行培养 优点：操作简单，对原生质体的损伤小，且易于添加新鲜培养基和转移培养物 缺点：原生质体分布不均匀，常发生原生质体粘连现象而影响其进一步生长和发育；难以跟踪观察某一个细胞的发育情况；一旦污染，全皿报废 固体平板培养:Solid culture 固体培养也就是琼脂糖包埋培养。低融点琼脂糖可在30?C左右融化与原生质体混合而不影响原生质体的生命活动。混合后的含有原生质体的培养基铺于培养皿底部，封口
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原生质体融合技术简介.ppt
原生质体融合
一原生质体融合二原生质体融合的特点三原生质体融合的过程四原生质体融合的应用一原生质体融合定义：原生质体融合就是将两个亲株的细胞壁分别通过酶解作用加以剥除，使其在高渗环境中释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体。然后将两个亲株的原生质体在高渗条件下混合，由聚乙二醇助融，使它们相互凝集，通过细胞质融合接着发生两次基因组之间的接触、交换、遗传重组，在再生细胞中获得重组体。一原生质体融合原理：两个具有不同基因型的细胞，采用适宜的水解酶剥离细胞壁后，在融合剂作用下，两原生质体接触，融合成为异核体，经过繁殖复制进一步核融合，形成杂合二倍体，再经过染色体交换产生重组体，达到基因重组的目的，最后
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一种用于玉米原生质体分离的酶解液及分离方法和应用.pdf
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(22)申请日2023.12.20
(71)申请人深圳吉因加医学检
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(19)国家知识产权局
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(43)申请公布日 2022.05.27
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(22)申请日 2022.02.15
(71)申请人 河南工业大学
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一种日本结缕草原生质体及其制备与转化方法.pdf
(19)中华人民共和国国家知识产权局
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(21)申请号 202110215248.X
(22)申请日 2021.02.25
(71)申请人 北京市农林科学院
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植物细胞原生质体的分离融合.ppt
——10级生物技术冯德实验目的学习植物原生质体分离的方法了解并掌握利用PEG原生质体融合的原理和方法实验原理植物细胞相比于动物细胞具有一层细胞壁，当将细胞壁除去后就可以得到裸露的球形细胞，称之为原生质体。分离的原生质体在培养条件下具有再生新壁，，即具有细胞全能性。细胞壁的主要成份是纤维素、半纤维素和果胶质，它们分别经纤维素酶，果胶酶处理即可分解，从而脱去细胞壁。由于质膜完全暴露，原生质体具有摄取大分子(如核酸)、细胞器(如核、叶绿体)和细菌、病毒的能力，因此是进行遗传操作，基因转移的好材料。而原生质体融合是实现上述目的的一个极为重要的手段。同种或异种原生质体可在聚乙二醇(PEG)诱导下产生异核