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第六章植物的胚胎培养和离体授粉总结.ppt

发布:2017-05-04约5.71千字共48页下载文档
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在无菌条件下,培养离体的未受精雌蕊或胚珠和花粉,使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠,完成受精过程而获得有生活力种子的技术。 * (一)离体授粉的基本技术过程 1、亲本的选择: 父本(收集花粉): 套袋(时期) 表面消毒(时期) 花粉收集(时期) 母本(选取雌蕊或胚珠): 套袋 表面消毒 去雄 剥取雌蕊或胚珠 不同植物最适时期不同,但必须是未受精状态 2、离体授粉受精: 父本(收集花粉): * (二)影响离体授粉成功的因素 1 、发育时期 2 、培养基成分 3 、培养温度 4 、材料消毒 5 、母体组织的保留 6、 授粉方式 * (三) 离体授粉技术在杂交育种上的应用 克服植物远源杂交不亲和性 克服自交不亲和性 诱导孤雌生殖 * * * 四、 植物胚乳培养 胚乳培养(Endosperm culture): 是指将胚乳组织从母体上分离出来,通过离体培养,使其发育成完整植株的技术。 * (二)概述 胚乳培养的最早研究始于1933年,Lampe和Mills首例进行了玉米胚乳培养。胚乳培养的研究主要集中在以下一些问题的探讨: 胚乳细胞的全能性。在离体培养条件下,胚乳细胞是否与其它体细胞和花粉一样,具有全能性而再生植株。 大多数被子植物的胚乳是三倍体,能否通过胚乳培养获得三倍体植株而得到无籽结实;通过胚乳培养技术,探索改良农、林及园 艺植物三倍体育种技术的可能性。 * * 研究离体培养条件下胚和胚乳的关系。 到目前为止,已有40多种植物的胚乳进行了培养。其中苹果、柚、橙、檀香、枸杞、猕猴桃、玉米、大麦、小黑麦、水稻、马铃薯、梨、核桃等的胚乳培养得到了再生植株。其它有的分化除芽、根、叶等或得到愈伤组织。 * 影响胚乳培养的因素 基因型; 胚乳的发育时期; 培养条件; * A、胚乳发育时期的影响 发育早期胚乳:操作不便,诱导率低 游离核期或刚转入细胞期的核型胚乳:难获得愈伤 旺盛生长期(细胞形成期)胚乳:易诱导产生callus 成熟期胚乳:已高度分化,很获诱导脱分化 * 水稻:授粉后4 d 黑麦草:授粉后8-10 d 黄瓜:授粉后7-16 d 梨:授粉后20 d 大麦:授粉后10-20 d 玉米和小麦:授粉后8 -12 d 一些草本植物胚乳培养的适宜取材时期 * B、培养基和激素的影响 基本培养基:MS、B5、MT、White、LS等 水解酪蛋白、酵母提取物也很必要 激素:要求特殊 大麦胚乳只有在添加2,4-D的培养基上才能生长 猕猴桃胚乳培养中,玉米素最好 枣的胚乳培养中,激素似乎无特殊要求 * C、胚因子 胚在萌发时产生某种物质影响胚乳的发育过程,这种胚对胚乳的影响,即称为“胚因子”影响。 胚乳培养中,外源GA3能部分取代胚因子。 * D、其他因素的影响 蔗糖浓度:3%-5% 温度:25℃ pH值:如 蓖5.0; 玉米 6.1-7.0;苹果 6.0-6.2等 * 胚乳培养植株要进行染色体倍性检测 (1)因为在胚乳培养中,由于愈伤组织的倍性比较复杂,有二倍体、三倍体等多种倍性以及非整倍体,真正的三倍体细胞所占的比例甚小。 (2)诱导分化的胚乳植株中染色体数也不稳定,同一植株往往有可能是不同倍性的嵌合体。 * 再生植株的染色体倍数 1、稳定型 继代培养后染色体无变化,植株三倍体 2、畸变型 细胞染色体异常,植株为多倍体,且不一致,形成多种倍性细胞组成的嵌合体。 子房的结构;果实的结构;种子的结构简介 * * 1)玉米种子消毒 2)在黑暗条件下,将种子放在无菌湿润的含滤纸的培养皿中培育6hr。 3)将吸涨的种子在无菌培养皿内将胚分离出来 4)无菌水冲洗3次 5)在MS培养基中暗培养。 6)观察:2d出现胚根,3-4 d出现胚芽,10d长成幼苗。 牡丹种子的千粒重约为150g-180g,所以,播种繁殖的繁殖系数较大,可以在短期内获得大量苗木,根据这个特点,牡丹播种繁殖多用于生产药用牡丹和培养嫁接用的砧木。牡丹单瓣型品种结实力强、籽粒饱满、发芽率高、适应性广、生长势强、变异性小,其中以单瓣型品种“凤丹”最具代表性,所以,在生产药用牡丹和培养嫁接用砧木时,多利用单瓣型品种的种子,特别是“凤丹”用量最大。牡丹半重瓣或重瓣型品种的雄蕊或雌蕊常瓣化或退化,结籽少或不结籽,籽粒瘪,发芽率低,变异性大,所以,半重瓣或重瓣型的种子一般用于新品种选育。无论是单瓣型品种的种子,还是半重瓣、重瓣型品种的种子,播种后3-5年方可开花,但以5 年生以上的植株结籽多,籽粒饱满。 * 因为幼胚是异养型,处于这一时期的幼小胚完全依赖和吸收周围组织的有机营养物质,而成熟胚则为自养型,这一时期
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