雷公藤脚基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析.doc

雷公藤脚6基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析 关键字： 雷公藤脚6基焦磷酸合酶基因TwGPPS克隆与表达分析 本文为Word文档，感谢你的关注！ 　　[摘要]根据雷公藤悬浮细胞转录组数据设计特异引物，采用cDNA末端快速扩增技术克隆雷公藤?脚６?基焦磷酸合酶基因TwGPPS1，TwGPPS2 全长cDNA，并进行生物信息学分析和蛋白表达研究。首次克隆得到TwGPPS1核苷酸的完整开放阅读框长度为1 278 bp，编码425个氨基酸蛋白，预测蛋白等电点为668，相对分子质量为47189 kDa；TwGPPS2核苷酸的完整开放阅读框长度为1 269 bp，编码422个氨基酸蛋白，预测蛋白等电点为671，相对分子质量为46774 kDa；进一步构建了原核重组表达载体pET32aTwGPPS1，pET32aTwGPPS2，并成功诱导出TwGPPS1，TwGPPS2重组蛋白，为深入研究此关键酶基因功能和雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。 　　[关键词]雷公藤； ?脚６?基焦磷酸合酶； 克隆； 生物信息学分析； 蛋白表达 　　Cloning and protein expression analysis of geranyl diphosphate synthase 　　genes in Tripterygium wilfordii 　　TU Lichan1 ， ZHANG Yifeng1，2， SU Ping1，2， HU Tianyuan1， TONG Yuru1，2， GUAN Hongyu 1，2， 　　ZHAO Yujun2， ZHANG Xianan1， YUAN Yuan2*， GAO Wei1*， HUANG Luqi2 　　（ 1School of Traditional Chinese Medicine， Capital Medical University， Beijing 100069， China； 　　2State Key Laboratory of Daodi Herbs， National Resource Center for Chinese Materia Medica， 　　Chinese Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China） 　　[Abstract]Based on the transcriptome data， the study cloned fulllength cDNA of TwGPPS1 and TwGPPS2 genes from Tripterygium wilfordii suspension cells and then analyzed the bioinformation of the sequence and protein expression The cloned TwGPPS1 has a 1 278 bp open reading frame （ORF） encoding a polypeptide of 425 amino acids The deduced isoelectric point （pI） was 668， a calculated molecular weight was about 47189 kDa. The fulllength cDNA of the TwGPPS2 contains a 1 269 bp open reading frame （ORF） encoding a polypeptide of 422 amino acids The deduced isoelectric point （pI） was 671， a calculated molecular weight was about 46774 kDaThe entire reading frame of TwGPPS1，2 was cloned into the pET32a（+） vector and expressed in E. coli BL21 （DE3） cells to obtain the TwGPPS protein， which laid a basis for further study on the regulation of terpenoid secondary metabolism and biological synthesis. 　　[Key words]Tripterygium wilfordii； geranyl diphosphate synthase； c