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18 生物学通报
染色质免疫沉淀技术——一种研究基因表达调控的工具
马金友刍} 燕 (河南科技学院动物科学学院 河南新乡 453003)
摘要 染色质结构在基因表达调节中起着重要的调节作用。利用甲醛固定活细胞中的DNA与蛋
定的能
白质.通过免疫沉淀分离复合物的染色质免疫沉淀法是研究体内DNA和蛋白质相互作用的一种新方
源与实验时 间。
法,它不仅可用来研摧州鎏琶钢薹‘冀嚣雾荔鬈匿蕞薷参登;落,圭囊荔%尖百夏卷薹骱科薹鹫蓍堕然需
空白 1(2、3) 5)油酸工作曲线的绘制方法见文献7。
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吐温一80的正己烷溶液/mL15 15 4结论
羹j
三油酸甘油酯,mL 4.5 4.5 本文 提出了适合于微乳液体系中脂肪酶酶活测
乏键鞘 坠妻鬟 鐾雾藩燃 翼彳垂
缓冲液/mL 0.5 O.5
pH7.0 定的分光光度法,即以吐温一80为表面活性剂,正己烷
在旋转蒸发 器上预热lOmin(37℃)
恁霸%蜴德坚强滓鬻~溶笺塞襄墓鬻熏囊薹蘸 为有机溶剂.三油酸甘油酯为底物,旋转蒸发器+真空
缓冲液/斗L 180 0
pH7.O
0.2“g囊:鬟萎囊篓羹慧囊薹羹羲菱薹羹塑囊篓羹薹篓囊蒸/mL酶液/斗L 0 180 泵为反应设备的测试方法。这种方法具有成本低,灵
真空蒸发旋转反应5min 敏, 重复性好等优点,可作为脂肪酶活性测定的一个可
墅雾錾夔;藿囊蠢囊羹鬟蠢鬟囊菱鬟羹薹囊鬻霪冀囊
取反应液,mL 1.O 1.O 靠方法。当然,这种方法也有一些不足,如果能够设计
薹鎏蚕薹燮蠢墼羹i舔霉氡囊铥刊
苯,mL 9.O 9.0
一种可同时装多个烧瓶的旋转蒸发器进行反应的话,
CuA。2/吡啶水溶液,mL 2 2
旋涡混合反应10min. 可以消除真空度和水浴温度的不稳定造成的误差,这
离心8mi 样可 以在一定程度上提高脂肪酶的测定酶活.从而为
n(转速为10000转)
笔者进一步的脂肪酶抑制剂的研究奠定基础。
离心结束后,各取上清液于1cm玻璃比色皿中.以 主要参考文献
空白为参比,测样品1、2、3在715nm处的吸光度A,三 l高贵,韩四平,王智等.脂肪酶活力检测方法的比较.药物生物技
者求平均值的A,。,。根据A,。,,在油酸工作曲线上用内插 术,2002,5(9):281—284.
法计算出油 酸含量,再根据酶活定义算出酶活及比活。 2黄锡荣,张文娟,宋少芳等.分光光度法测定微乳液中脂肪酶的酶
3结果与讨论 活.化学通报,2001,10:659—661.
3秦畴.碱性脂肪酶测定方法的探讨.无锡轻工大学学报,1998,17
在检测条件 下,水解三油酸甘油酯每分钟产生
(1):82—85.
1斗mol脂肪酸的酶量为一个单位(U儋)。对同
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