文档详情

染色质免疫沉淀技术——一种研究基因表达调控的工具.pdf

发布:2017-05-29约8.55千字共3页下载文档
文本预览下载声明
18 生物学通报 染色质免疫沉淀技术——一种研究基因表达调控的工具 马金友刍} 燕 (河南科技学院动物科学学院 河南新乡 453003) 摘要 染色质结构在基因表达调节中起着重要的调节作用。利用甲醛固定活细胞中的DNA与蛋 定的能 白质.通过免疫沉淀分离复合物的染色质免疫沉淀法是研究体内DNA和蛋白质相互作用的一种新方 源与实验时 间。 法,它不仅可用来研摧州鎏琶钢薹‘冀嚣雾荔鬈匿蕞薷参登;落,圭囊荔%尖百夏卷薹骱科薹鹫蓍堕然需 空白 1(2、3) 5)油酸工作曲线的绘制方法见文献7。 囊霎j魁瑟茄赫弘薹冀形甜往譬薹羹藿娄是驰型业基。篓耐i蝤篓誊鲤萄雾黯毽辇受争囊南幽薹蓉啪蠹鲥 吐温一80的正己烷溶液/mL15 15 4结论 羹j 三油酸甘油酯,mL 4.5 4.5 本文 提出了适合于微乳液体系中脂肪酶酶活测 乏键鞘 坠妻鬟 鐾雾藩燃 翼彳垂 缓冲液/mL 0.5 O.5 pH7.0 定的分光光度法,即以吐温一80为表面活性剂,正己烷 在旋转蒸发 器上预热lOmin(37℃) 恁霸%蜴德坚强滓鬻~溶笺塞襄墓鬻熏囊薹蘸 为有机溶剂.三油酸甘油酯为底物,旋转蒸发器+真空 缓冲液/斗L 180 0 pH7.O 0.2“g囊:鬟萎囊篓羹慧囊薹羹羲菱薹羹塑囊篓羹薹篓囊蒸/mL酶液/斗L 0 180 泵为反应设备的测试方法。这种方法具有成本低,灵 真空蒸发旋转反应5min 敏, 重复性好等优点,可作为脂肪酶活性测定的一个可 墅雾錾夔;藿囊蠢囊羹鬟蠢鬟囊菱鬟羹薹囊鬻霪冀囊 取反应液,mL 1.O 1.O 靠方法。当然,这种方法也有一些不足,如果能够设计 薹鎏蚕薹燮蠢墼羹i舔霉氡囊铥刊 苯,mL 9.O 9.0 一种可同时装多个烧瓶的旋转蒸发器进行反应的话, CuA。2/吡啶水溶液,mL 2 2 旋涡混合反应10min. 可以消除真空度和水浴温度的不稳定造成的误差,这 离心8mi 样可 以在一定程度上提高脂肪酶的测定酶活.从而为 n(转速为10000转) 笔者进一步的脂肪酶抑制剂的研究奠定基础。 离心结束后,各取上清液于1cm玻璃比色皿中.以 主要参考文献 空白为参比,测样品1、2、3在715nm处的吸光度A,三 l高贵,韩四平,王智等.脂肪酶活力检测方法的比较.药物生物技 者求平均值的A,。,。根据A,。,,在油酸工作曲线上用内插 术,2002,5(9):281—284. 法计算出油 酸含量,再根据酶活定义算出酶活及比活。 2黄锡荣,张文娟,宋少芳等.分光光度法测定微乳液中脂肪酶的酶 3结果与讨论 活.化学通报,2001,10:659—661. 3秦畴.碱性脂肪酶测定方法的探讨.无锡轻工大学学报,1998,17 在检测条件 下,水解三油酸甘油酯每分钟产生 (1):82—85. 1斗mol脂肪酸的酶量为一个单位(U儋)。对同
显示全部
相似文档