实验11植物组织培养2013-9-23.ppt

* 第四部分 :浅尝现代生物技术 实验目的: 1.进行菊花的组织培养 2.尝试植物激素的应用 通过必修课的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？ 组织培养 营养繁殖 扦插 嫁接 压条 扦插 嫁接 压条 一、组织培养概述 　　 组织培养就是取一部分植物组织，如叶、芽、茎、根、花瓣或花粉等，在无菌条件下接种在三角瓶中的琼脂培养基上，给予一定的温度和光照，使之产生愈伤组织，或进而生根发芽。 1.概念: 2.植物组织培养的基本过程: 离体的植物器官、组织、细胞 脱分化 愈伤组织 再分化 胚状体 植物体 3、植物组织培养的原理是什么？ 植物细胞具有全能性：细胞具有发育成完整个体的潜能 未分化薄壁细胞团 上面的示意图中还有什么地方不够完善的？ 没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。 无菌条件 4.植物组织培养条件 含有必需营养成分的培养基、植物激素 一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。 细胞分裂素/生长素 低 利于根的形成 大致相等 愈伤组织继续生长而不分化 高 诱导芽的形成 1、新芽形成的必需条件？ 细胞分裂素浓度大于生长素浓度 2、培养形成完整新个体过程中，对细胞分裂素和生长素浓度的调控关键是？ 适当调控不同培养期的培养基中细胞分裂素与生长素的浓度和它们的比例 3、为什么用人工合成的生长素类似物萘乙酸（NAA），细胞分裂素类似物苄基腺嘌呤（BA），不用天然激素？ 人工合成的植物激素在植物中没有相应分解的酶，作用时间长，作用效果明显 组培必需营养成分 大量元素 微量元素 常用的培养基是MS培养基 无机盐 有机成分 注意：MS培养基可以现配现用，也可以配成母液在冰箱保存，用时稀释 二、菊花的组织培养 1、配制培养基 ①成分：大量元素、微量元素、有机成分、激素和琼脂 ④类型：MS培养基、发芽培养基和生根培养基 ② 作用：为植物组织或器官生长和发育提供营养条件 ③ 配制：称量、溶解、调pH、融化、分装（三角瓶）、加盖、灭菌 发芽培养基 MS培养基+BA+NAA+蔗糖+琼脂 生根培养基 MS培养基+NAA+蔗糖+琼脂 区别 培养基标号 A B C 成分 蛋白胨、酵母提取物、氯化钠、水 葡萄糖、氯化钠、磷酸氢二钾、酚红、琼脂糖、水 MS培养基、蔗糖、激素 注意：萘乙酸用少量0.1mol/l氢氧化钠溶液溶解，苄基腺嘌呤用少量0.1mol/l盐酸溶解。也可制成母液冰箱中保存 2、灭菌 装有培养基的三角瓶封口膜封好，1kg压力121℃灭菌15~20min 3、超净台操作 二、菊花的组织培养 （1）取外植体 ①无菌幼苗：在超净台上将其切段,每段至少1张叶片 70％乙醇中浸泡10分钟 5％次氯酸钠溶液中浸泡5min 5％次氯酸钠溶液中浸泡5min 超净台上用无菌水清洗 ②自然生长幼苗： （2）接种 在酒精灯旁，将每段放入1生芽培养基中，使茎的一部分插入培养基内，盖上封口膜。每瓶也可放入2~3段幼茎切段 日光灯下保持18~25℃的温度培养,每天光照不少于14.5h 生芽培养 3、超净台操作 二、菊花的组织培养 （3）转培养基-生根培养 2~3周后,在酒精灯旁将丛状苗在无菌条件下转入生根培养基中,在上述条件下继续培养. 日光灯下保持18~25℃的温度培养,每天光照不少于14.5h 生根条件 （4）移栽锻炼 将苗转移至草炭土或蛭石中,用玻璃罩或塑料布保持80％以上的湿度,2~3天后打开逐渐降低湿度进行锻炼,直到将罩全部打开处于自然湿度下 （5）定植栽培 再转移至土壤中培养（定植），即可长成植株并开花 1、外植体消毒不彻底 2、培养基及接种器具灭菌不彻底 3、接种操作时带入 4、环境不清洁 污染途径 * * *