SN_T 1675-2011真鲷虹彩病毒检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1675—2011代替 SN/T 1675—2005真鲷虹彩病毒病检疫技术规范Quarantine protocol for red sea bream iridovirus disease (RSIVD)2011-12-01 实施2011-05-31发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准真鲷虹彩病毒病检疫技术规范·SN/T 1675--2011*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×123001/16印张１字数25千字2011年 11月第-一版2011年11月第次印刷印数1—1600*书号：155066·2-22639 SN/T 1675—2011言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1675—2005《鱼真鲷虹彩病毒聚合酶链反应操作规程》。本标准与 SN/T1675--2005相比，主要技术差异如下：增加现场诊断；增加间接荧光抗体试验；一增加病毒的细胞分离；-对原标准中聚合酶链式反应(PCR)进行修改。本标准修改采用了OIE《水生动物疾病诊断手册》(2009版)第2.3.7章。本标准与OIE《水生动物疾病诊断手册》（2009版，第2.3.7章）相比，主要差别如下：-删除了 OIE手册中真鲷虹彩病毒病防控和流行病学内容；重新编排了格式。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出人境检验检疫局。本标准主要起草人：吴文忠、兰文升、刘、吴海峰、方成俊、张伯强、郑腾。 SN/T 1675--2011真鲷虹彩病毒病检疫技术规范1 范围本标准规定了真鲷虹彩病毒病（red sea bream iridovirus disease,RSIVD)的临床和实验室检测标准方法。本标准适用于水生动物真鲷虹彩病毒病的检测和诊断。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T18088出人境动物检疫采样。3概述真鲷虹彩病毒病(RSIVD)是养殖海水鱼类的种重要疾病，被列人世界动物卫生组织(OIE)水生动物疫病名录,是水生动物及其产品的国际贸易中，所监测的鱼类重要疾病之一（参见附录 A）。对RSIV 的监测、检测和诊断方法见附录 B。4缩略语下列缩略语适用于本文件。CPE(cytopathic effect):细胞病变IFAT(immunofluorescent antibody tests):免疫荧光抗体试验ISKNV(infectious spleen and kidney necrosis virus):传染性脾肾坏死病毒PCR(polymerase chain reaction):聚合酶链式反应RSIVD(red sea bream iridoviral disease):真鲷虹彩病毒病RSIV(red sea bream iridoviral virus):真鲷虹彩病毒5主要仪器和设备5.1普通倒置显微镜。5.2荧光显微镜。5.3电子显微镜。5.4热循环扩增仪（PCR仪）。5.5恒温培养箱。5. 6离心机。5.7凝胶成像仪。5.8 DNA 电泳系统。 SN/T 1675—20116　主要试剂和材料GF(Grunt fin)细胞系：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。6.16.2．L-15 培养基（含 Eagle’s平衡盐溶液）。6.3小牛血清(FBS)。6.4标记了异硫氰酸荧光素(FITC)的抗小鼠的抗抗体。6.5抗RSIV的单克隆抗体：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。6.6 PCR 有关试剂。6.7RSIV：由国家质量监督检验检疫总局指定单位提供。6.8引物：引物 1:1-F:5-CTC AAA CAC TCT GGC TCA TC-3引物 2:1-R:5-GCA CCA ACA CAT CTC CTA TC-3引物1和引物2可扩增RSIV和ISKNV中570-bp的基因片段。引物 3:4-F:5-CGG GGG CAA TGA CGACTA CA-3′引物 4:4-R:5′-CCG CCT GTG CCTTT CTG GA-3引物3和引物4只扩增RSIV568bp的基因片段。7抽样出境检疫抽样应在原产养殖场进行，进境检疫抽样应在进出境临时检疫隔离场(池）进行，抽样要求根据GB/T18088的要求执行，抽样数按照附录C确8现场诊断8.1 临床症