离子交换分离原理及设备经典.ppt

Column Chromatography Gel Filtration -size Ion Exchange - charge Affinity Chromatography Uses specific binding property to attach protein to column Increase concentration of ligand to elute the protein Examples: antibody columns - monoclonal antibody attached to column glutathione column – binds glutathione-S-transferase on target 实验室层析和大规模层析的分别 线性放大 ?KTA? explorer10 大型层析柱 多种大小,材料可供选择,柱床体积高达千多升 也可以订做 经济型 INdEX 和 层叠柱 制药用BPG 和CHROMAFLOW 柱 极高标准的 BPSS 柱 专为 SOURCE 填料设计的 FineLINE 柱 CHROMAFLOW 自动装卸层析柱 装卸柱到清洗都无需打开柱头 安全,重复性高 节省人力 STREAMLINE 扩张柱床吸附技术 配合STREAMLINE填料和层析柱使用 粗样无需离心，过滤，直接上柱 层析法回收率高，选择性多，可自动化 取代离心和超滤设备 色谱分离设备 实验室 大规模生产 分辨率 越多峰越好 要求纯度 种类 提高分辨率 纯度 定性 增加 增加 样品量 产量 (生产力) (峰越少越好) 上样速度 不注重 最大样品处理速度 次/h 生产力=g/ml 胶/h 固定以下条件： 1. 相同线行流速 2. 相同缓冲液 3. 相同填料 4. 相同柱高 5. 相同样品浓度和pH 6. 相同样品体积和柱床体积比例 7. 相同梯度体积和柱床体积比例 放大： 1. 柱直径 2. 体积流速 3. 上样体积 2.0 1.0 0 0 1 2 3 4 5 6 (column volumes) A 280 nm 2.0 1.0 0 0 1 2 3 4 5 6 (column volumes) A 280 nm SOURCE 30RPC FineLINE 200L 400-fold scale up 10 mm diameter column Column: SOURCE 30RPC, a) 10x300 mm (23.6 ml)b) FineLINE 200L, 100x300 mm (9.4 l) Sample: Mixture of Angiotensin II, ribonuclease and insulin Sample load: 0.064 mg/ml medium Eluent A: 0.1% TFA/0.05 M NaCl Eluent B: 0.1% TFA/60% n-propanol Flow rate: 150 cm/h a) 2 ml/minb) 785 ml/min Gradient: 20-70% B, 5 column volumes 切实可行的可放大性 BioProcess 23.6-ml column 9.4-litre column 切实可行的可放大性 Chromaflow 自动装卸填料生产柱示范录像 * 离子交换分离原理及设备 离子交换树脂及其分离原理 离子交换树脂的分类及合成 离子交换树脂的理化性能 离子交换机理及选择性 离子交换装置及再生 离子交换设备及计算 离子交换设备的结构 离子交换设备的计算 离子交换树脂的分类 按树脂骨架的主要成分分为聚苯乙烯型树脂、聚丙烯酸型树脂、酚-醛型树脂等； 按聚合的化学反应分为共聚型树脂和缩聚型树脂； 按树脂骨架的物理结构分为凝胶型树脂(微孔树脂)、大网络树脂(大孔树脂)及均孔树脂； 按树脂的酸碱性分为强酸性、弱酸性阳离子交换树脂和强碱性、弱碱性阴离子交换树脂。 几类树脂性能的比较 慢 快 慢 快 交换速率 1.2～2倍 3～5倍 1.5～2倍 3～5倍 再生剂用量 洗涤时水解 稳定 洗涤时水解 稳定 盐的稳定性 碱性交换力小 无 酸性交换力小 无 pH的影响 伯胺、仲胺 季胺 羧酸 磺酸 活性基团 弱酸性 强酸性 弱酸性 强酸性 阴离子交换树脂 阳离子交换树脂 类型 性能 离子交换树脂的理化性能