微生物限度检查法操作规程.doc

微 生 物 限 度 检 查 法 操 作 规 程 第1页 共25页 执 行 日 期 起草部门 质量管理部 文件编号 SOP QC-038-02 起 草 人 审 核 人 批 准 人 起草日期 审核日期 批准日期 分发部门：质量管理部 1 目的：建立微生物限度检查的基本操作，为微生物检查人员提供正确的操作依据。 2 范围：适用于药品的微生物限度检查。 3 责任：QC化验员、QC主任。 4 内容： 依据《中国药典2005年版》、中华人民共和国卫生部《药品卫生检验方法》。 细菌、霉菌和酵母菌计数 1 简述 细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的方法，也是评价生产企业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。 细菌、霉菌和酵母菌计数除另有规定外，均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上最常用的一种方法。以琼脂平板上的细菌、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在规定条件下所生成的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、PH和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。 一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落数均可由一个或多个细菌生长繁殖而成。因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位（colony forming unity,cfu）不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。 在进行本法测定时必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。 2 仪器、设备 2.1设备 2.1.1无菌室 微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的空气净化系统。 2.1.1.1结构和要求见无菌检查法。 2.1.1.2操作间 操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。 2.1.1.3 缓冲间 缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。 2.1.1.4洁净级别及检查方法 通常采用尘粒数和浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测定方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 洁净级别 尘粒数/m3 浮游菌（个）/m3 沉降菌（个）/（￠90mm·0.5h） 0.1%苯扎溴铵溶液或其他消毒液擦拭操作台、地面及可能污染的死角，然后启动室内的层流净化装置，同时用紫外灭菌灯照射30分钟。 2.1.2阳性菌试验应另设单独的净化工作台，不得在供试品检验用的无菌室内或净化工作台上操作。 2.1.3无菌室与洗刷、灭菌消毒、培养、结果观察及办公室等配套设施应相对集中，布局合理，避免污染，便于管理。 2.2仪器 2.2.1 恒温培养箱（30～35℃～r/min）、恒温水浴、离心机、电热干燥箱（250℃～300℃）、电冰箱、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定。）、菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平、pH系列比色计。 5.2.2.2 玻璃器皿、锥形瓶（250～ml，内装玻璃珠若干；500ml，1000ml）、培养皿（直径9cm）、量筒（100ml，500ml）18mm×180mm、28mm×198mm）ml分度0.01，10ml分度0.1）、注射器（20ml或30ml）及针头、载玻片、盖玻片、带盖玻璃消毒缸、带盖不锈钢筒。玻璃器皿用前应用洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。使用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。吸管、量筒应不挂水滴，无残留抗菌物质。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm适宜疏松的棉花，置吸管筒内或牛皮纸袋中。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞或棉塞，若用震荡器制备混悬液时，尚需用玻璃纸包裹瓶塞，以免震荡时供试液污染瓶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30分钟，烘干或160℃干热灭菌2小时，备用。2.2.3用具 大、小橡皮乳头（放于干净带盖的容器中，并应定期用70%～75%乙醇溶液浸泡）。无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。也可用一次性无菌物品。 接种环（白铱金或镍合金，环径4mm～5mm、长度6cm～10cm）、酒精灯、乙醇棉球或碘伏棉球、灭菌剪刀或灭菌手术刀和灭菌镊子、灭菌钢锥、灭菌称样纸、不锈钢药匙、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆、实验记录纸等。 3 试液、稀释剂和试剂 3.1 试液 3.1.1 0.1%苯扎溴铵溶液或其他适宜消毒液（供洗手、擦拭操作台面用）。