基于ISSR和RAPD标记的八株灰树花栽培菌株遗传多样性分析探究.pdf

食用菌学报@2013．20(4)：1～5 文章编号：1005—9873(2013)04—0001—05 基于ISSR和RAPD标记的八株灰树花 栽培菌株遗传多样性分析 王春晖，尹永刚‘，胡汝晓，彭运祥 (湖南省食用菌研究所，湖南长沙410013) 摘要：育种亲本的选择一般以所选亲本亲缘关系的远近为基础，本研究采用ISSR和RAPD分子标记技术 对8株灰树花(Grifolafrondosa)栽培菌株进行遗传多样性分析。16个ISSR引物共扩增出214条位点片段， 其中多态性片段196条，占总片段条数的91．6％，菌株间相似系数变化范围为0．2649--0．8772，在相似系数为 0．488处将8个菌株分为4大类；19个RAPD引物共扩增出265条位点片段，其中多态性片段238条，多态性 比率为89．8％，相似系数变化范围为O．3382～0．8582，在相似系数为0．“2处将8个菌株分为4大类。同时 将RAPD与ISSR扩增结果进行综合性分析，亲缘关系树状图在分子水平上显示了供试菌株之间的亲缘关系， 为今后灰树花的遗传多样性研究及遗传育种亲本的选配提供了理论依据。 关键词：灰树花；分子标记；亲缘关系；多态性 术，基于ISSR的聚类分析能有效地反映杂交子 灰树花(Grifola，rondosa)又称粟蘑、千佛 菌、贝叶多孔菌、舞茸，野生灰树花大多发生在板 代的遗传分化[6’71，在食用真菌领域常用于物种 栗、栎树、栲树等壳斗科树种及阔叶树树桩基部 鉴定、遗传分类、亲缘关系及遗传多样性等研究。 或倒腐的近地树干上，以分解树木的心材为营 本研究将采用ISSR标记、RAPD标记以及 养，造成树木心材腐朽，是一种典型的白腐菌nj， 两者相结合的方法分别对8个灰树花栽培菌株 同时也是一种珍稀的大型食药用真菌，子实体味 进行遗传关系分析，揭示其中遗传多样性，为灰 道鲜美，柔软脆嫩，富含蛋白质、纤维、维生素，深 树花种质资源的遗传多样性和灰树花育种亲本 受人们喜爱瞳]，在药用价值上具有抗肿瘤、免疫 选配研究提供科学依据。 刺激、抗血栓、抗菌、抗病毒及抗氧化等多重功 1材料与方法 效[3]。目前国内外关于灰树花的研究报道主要 集中在栽培技术和生物活性物质成分与功能研 I．I供试菌株 究口^1等方面，而关于该物种的分子生物学研究 供试栽培菌株编号及来源见表1。 报道较少。 I．2菌丝体培养和基因组DNA提取 随机扩增多态性(Randomamplified供试菌株取10小块菌丝体接种于PDB液体 DNA，RAPD)技术是1990年由培养基(200 L水， polymorphic g去皮马铃薯，20g葡萄糖，1 r／rain振荡培 WILLIAMS首先报道的一种分子标记技术[5]，pH自然)中，25℃恒温条件下130 养10 Mini 具有多态性高、操作简单、直观可靠、DNA用量 d。菌丝体基因组DNA采用DNeasy PlantDNAExtraction 少、随机引物没有严格的种属界限等优点，已被 Kit(Qi